荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸.pptVIP

荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸 实验化学3-2 （仪器分析实验） 1、实验目的 （1）掌握荧光法测定药物中乙酰水杨酸的方法 （2）了解Cary Eclipse型荧光光谱仪的基本操作 （3）强化称量、移液、配溶液等基本操作 实验原理 辐射能量传递过程 溶液浓度与荧光强度的关系 有线性关系： 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 仪器结构流程 荧光分析方法 仪器与试剂 仪器：Cary Eclipse荧光光谱仪，石英比色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器，漏斗，量筒，滤纸。 试剂：乙酰水杨酸，水杨酸，乙醇，阿司匹林药片。 实验步骤 实验指导 1、溶剂用量控制在600mL，要求提高清洗效率，减少移取溶剂时的损失，以节约试剂，同时保护健康和环境。 2、用加长的胶头滴管移取少量的试剂，切忌直接倾倒。 3、容量瓶使用25mL，注意相应液体体积的改动 4、要保证实验过程无水 5、在做标准曲线时，在做每一个点前，一定要用这个点的溶液清洗比色皿至少三次，以保证能作出曲线。 6、比色皿的检测面和放入检测腔的位置一定要固定。 * * 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量； 传递途径 辐射跃迁 荧光 延迟荧光 磷光 内转移 外转移 系间跨越 振动弛预 无辐射跃迁 激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大； 荧光：10-7～10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：10-3～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态； S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（ 多为 S1→ S0跃迁），发射波长为 ? ‘2的荧光； 10-7～10 -9 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长； ? ‘2 ? 2 ? 1 ； 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态（ T1 → S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁） S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-3～10 s 。 光照停止后，可持续一段时间。 分子产生荧光必须具备的条件 1）具有合适的结构； 2）具有一定的荧光量子产率。 荧光量子产率（?）： 荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关，如外转换过程速度快，不出现荧光发射； 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程如图： 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器； 光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区) 检测器：光电倍增管。 特点 1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检测下限：0.1～0.1?g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。 2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； 3）试样量少 缺点：应用范围小。 1、ASA和SA贮备溶液的配制 （1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1％醋酸-氯仿溶液中，用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用； （2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中，用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。 2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制 将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍)。用得到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。 3、标准曲线的制作 (1) ASA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为