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PAGE PAGE 1 生化工程复习题 kLa的测定。 在发酵体系中，依据发酵液中氧的物料平衡规则，得到 dCL/dt = kLa(C*-CL) – r 其中CL发酵液氧浓度，C*发酵液体系的饱和氧浓度，kLa体积溶氧系数，r摄氧率，则： CL=(-1/ kLa)(dCL/dt +r)+C* 首先，在某个时刻保持发酵液中的氧浓度维持在某个值，停止向培养液中通气，并维持搅拌，根据培养液中溶氧浓度的变化可以求出摄氧率。当液体的溶氧浓度下降到一定程度时（不低于临界氧浓度），恢复通气，则培养液中的溶氧浓度逐渐升高，最后恢复到原先的水平。根据恢复通气后溶解氧变化曲线，用图解法求出与一定溶解氧浓度对应的dCL/dt（即曲线的斜率），将CL对(dCL/dt＋r)作图可以得到一条直线，其斜率为-1/kLa，在CL轴上的截距为C*。 提高kLa的途径。 增加搅拌转速N，以提高Pg，可有效的提高kLa； 增大通气量Q，以提高vs。在原通气量较低时，提高Q可以显著提高kLa。但当Q原已很高时，进一步提高Q，Pg将随之降低，其综合的效果将不会使kLa有明显提高，甚至可能降低。有的调节措施是将两者结合起来； 为了提高NV，除了提高kLa之外，提高C*也是可行的方法之一。通入纯氧，或在可能的条件下提高罐内操作压力，均可提高C*； 丝状菌的繁殖导致发酵液粘度的急剧上升和kLa的急剧下降。过分地提高转速及通气速率可能导致菌丝体的机械破坏及液泛。在此情况下可重复地放出一部分发酵液，补充新鲜灭菌的等体积培养基，这样可以使kLa大幅度回升。在抗生素发酵中有这样的实例； 向发酵液中添加少量的水不溶性另一液相，氧在这一液相中具有比在水中高的多的溶解度，如常用的正十二烷，称为氧载体。 影响kLa的因素。 物系的性质：粘度，扩散系数，表面张力 操作条件：温度，压力，通气量，搅拌转数 反应器的结构：反应器的结构型式，搅拌器结构，搅拌方式 发酵操作方式可分为分批、流加和连续三种，请： 图示三种方式时反应器中菌体浓度、基质浓度、产物浓度随发酵时间可能的变化规律； 分析分批、流加和连续三种方式各自的优缺点： 流加发酵 优点：(与间歇操作相比) 可以解除基质的抑制、产物反馈抑制和分解代谢物阻遏； 对于好氧培养，流加操作可避免一次性投糖过多造成细胞大量生长，耗氧过多，抑制通风搅拌设备不能匹配； 在某些情况下减少菌体生成量，提高有用产物的转化率； 维持添加的前体在低浓度水平上，可避免前体对细胞的毒副作用； 可以进行某个时间段反应过程的动力学研究，研究流加操作是达到自动控制和最优控制的前提。 优点：(与连续操作相比) 不需要严格的无菌条件； 细胞老化和变异的问题不严重； 产物浓度高，提取成本低； 使用范围广。 连续发酵 优点： 可用于进行细胞代谢、生理生化和遗传特性的研究； 提高生产效率； 产物质量比较稳定； 连续培养所需设备和投资少，而且便于自动化。 缺点： 长时间培养过程中，菌种易老化、变异，工程菌质粒易丢失和染杂菌等； 培养液中产物浓度较低，分离成本高； 新加入的培养基与原有的培养基不易完全混合，影响培养基和营养物质的利用。 简述连续培养技术的用途，在工业上采时存在的问题及可能的解决方法，并举出已在工业上采用的例子。 流加发酵一般的控制目标是什么？关键有哪些？ 补料分批发培养的适用范围？ 补料分批培养的类型？ 指数流加法[Ft=V0μeμt]的特点？ 补料的内容？ 流加操作的控制方式：无反馈控制和反馈控制 无反馈控制：加入基质的流量按预先设定的规律变化。恒流量流加、指数速率流加、变速流加。 反馈控制：间接控制和直接控制。 间接控制：以即重要又可检测的参数为控制指标。 直接控制：通过连续或间断地测定反应体系中的基质浓度作为指标进行控制。 为使细胞以恒定的比生长速率生长，应采用哪一种流加方式，为什么？ 请分别设计分批和连续实验确定细菌X的Monod方程常数（μm，KS），并说明： 如何确定某菌适用的Monod方程：Monod方程中的常数μm和Ks同样可用倒数图解法或线性回归得出，对方程：求倒数，得：，或：。应用方程2图解时，可得到相当精确的μm值，但在低S值时μ的偏差较大，影响KS的精度，而方程3则在实际的S值范围内有较高的精度，并且数据处理也来得简练些。 分批实验的不足； Monod方程中各个参数的意义是什么？ μm：最大比生长速率；μ：比生长速率； S：限制性基质浓度，mol/m3；Ks：微生物对基质的半饱和常数，mol/m3。 式中Ks大小说明细胞生长有什么特点？ KS的意义为最大比生长速率的一半，因此KS越大，说明细胞生长速度越慢，KS越小，说明细胞生长速度越快。 与酶促反应动力学（米氏方程）的区别，为什么与米氏方程（单基质单一酶反应）在形式上有相同性？ 莫诺方程和米氏方