玉米细菌性枯萎病及其病原菌的检测技术.docVIP

玉米细菌性枯萎病及其病原菌的检测技术 第24卷第12期 中国生物工程杂志 CHINAB10TECHN0L0GY2004年12月 玉米细菌性枯萎病及其病原菌的检测技术 吴琼 (1深圳出入境检验检疫局深 陈枝楠范怀忠金显忠 5180102华南农业大学资源与环境学院广州510640) 摘要玉米细菌性枯萎病是影响玉米生产的重要病害,该病害通过带茵的种子进行远距离传播,对 该病菌的检测成为防止和控制该病害的重要手段.介绍现有的检测该病菌的各种方法,即黑色素 选择培养法,d.uble—sandwichELISA以及RAPD.PCR,LCR.PCR,Nested.PCR,multiplePCR和荧光实 时PCR等分子生物学检测方法,并对这些方法的特性进行比较和探讨. 关键词玉米细菌性枯萎病菌检测分子生物学PCR 玉米细菌性枯萎病(BacterialWiltofcomor StewartsWilt)是玉米(ZeamaysL.)生产上的重要 病害…,一旦发病,对玉米生产带来毁灭性打击. 1995年Stewart首先在甜玉米上发现该病害并由 此命名.该病害是由玉米枯萎病菌Pantoe0st伽rtii subsp.stewartii(syn.Erwiniastewartii)引起.当玉 米植株在3～5叶期感染此病,生长严重受阻,造成 矮化萎缩.典型的症状是叶片出现水渍状,长条形 的灰绿色至黄色条斑,随着病害的发展,条斑逐渐 枯萎,整个植株迅速凋萎,最终死亡.几乎所有 的玉米品种都可被该病菌侵染,但是感病的程度有 很大的差异.齿形玉米较为抗病,即使受到侵染也 不会造成很大损失;甜玉米最易感染此病,而且一 经被侵染,发病严重,造成巨大的经济损失.即 使是同一品种,早熟系和晚熟系的抗病能力也不 同. 致病的P.stewartiisubsp.indologenes.除了寄主专 化性不同之外,两个亚种之间在生理生化特性上的 主要区别在于:顺式.9.十六碳脂肪酸,反式.十七碳 脂肪酸和直链十八碳脂肪酸的含量不同,病原菌的 脂肪酸主要是直链的十八碳,十六碳和顺式.9.十 六碳脂肪酸;P.stewartiisubsp.stewarii不产生吲 哚;不能水解马栗树皮甙;不能利用柠檬酸盐;不能 在顺乌头酸和DL-4.氨基丁酸上生长;不能分解以 下碳源产酸:L.鼠李糖,纤维二糖,麦芽糖,a.甲基- D.葡萄糖基,水杨苷,苦杏苷,丙二醇,甘油,己六 醇,纤维醇,D.葡萄糖酸酯,2一酮.D.葡萄糖酸酯或5- 酮.D.葡萄糖酸酯.Pantoeastewartiisubsp.stewartii 下分两个株系,其DNA的G+c比例分别为54.6 和55.1mo1%.模式菌株为ATCC8199亦即 NCPPB2295,ICMP257,DSM30176,ICPBSS11,IMET 11187[6] 1病原2传播途径 玉米细菌性枯萎病菌是一种黄色,不运动,革 兰氏阴性,兼性厌氧杆菌.根据DNA.DNA杂交结 果和DNA同源值比较分子系统发育的研究, Mergaert等建议将E.stewartii划归到Pantoe0 属,同时将E.an~alta$和E.1~redoyora合并为 Pantoeaananatis,而玉米细菌性枯萎病病原菌属于 Pantoeastewartii种,该种下分两个亚种,分别为玉 米枯萎病菌P.stewartiisubsp.stewarii和对玉米非 收稿日期:2004.07—26修回日期:2004—10—09 *通讯作者,电子信箱:joae819@hotmail.corn 玉米细菌性枯萎病主要通过玉米跳甲 (Chaetocnemapulicaria)传播,同时玉米跳甲也是该 病菌的主要越冬寄主.玉米跳甲的数量和玉米细 菌性枯萎病的发生程度密切相关.玉米跳甲以成 虫形式在土壤,植株残体和病种子上越冬,成为第 二年的初侵染源.在种子基部的维管束残基, 胚乳直到种皮表层都能观察到病菌,但胚芽不带 菌.多数学者认为种子是该病害重要的远距离 传播途径m,但是Block等则认为自然发 病的植株一般不产生种子,即使有个别的带菌种子 也因品质差被淘汰,同时带菌种子因萌发率极低而 第12期吴琼等:玉米细菌性枯萎病及其病原菌的检测技术23 不能传播病害,因此认为由商品玉米种子传播细菌 性枯萎病实际不存在. 3玉米细菌性枯萎病的检测技术 由于玉米上主要的腐生细菌为草生欧氏杆菌 Pantoeaagglolneral2$(syn.Erwiniaherbicola),该细菌 与玉米细菌性枯萎病菌在许多生理生化性状上相 似,其DNA的序列同源性也比较高,是检测该病原 菌时的主要干扰;同时,另一个亚种P.stewartii subsp.indologenes对玉米虽然没有致病力,玉米也 不是