色素的提取和分离.doc

实验九：叶绿体中色素的提取和分离 一、实验目的： 1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 2、探索叶绿体中有几种色素。 二、实验原理： 1、叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2、色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 三、实验材料： 新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶），无水乙醇，层析液（由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。93号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。 四、实验用具： 干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml），天平。 五、方法步骤： （1）称取5g绿色叶片并剪碎 提取色素 研钵→研磨→漏斗过滤→ （2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮 收集到试管内并塞紧管口 （1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线） 制滤纸条 （2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线 （1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 （2）干燥后重复划2-3次 （1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准） 纸上层析 （2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中 （3）用培养皿盖盖上烧杯 观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图） 最宽：叶绿素a； 最窄：胡萝卜素； 相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b； 相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。 六、考点提示： 1、二氧化硅：为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。 碳酸钙：保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。 丙酮：色素的溶剂。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。 2、扩散最快的是胡萝卜素（橙黄色），扩散最慢的是叶绿素b（黄绿色）。 3、滤纸上有四条色素带说明了绿叶中的色素有四种，它们在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。 4、裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。 5、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,防止两侧层析液扩散过快。这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。 6、根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯1cm ，高出的部分做直角弯折。 7、滤纸上的滤液细线如果触到层析液，细线上的色素就会溶解到层析液中，就不会在滤纸上扩散开来，实验就会失败。 8、画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中 9、研磨要迅速、充分。a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。 问题解答（1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？ 绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。 （2）过滤时为何用布不用滤纸？ 色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。 （3）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？ 因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。 （4） 滤液细线为何要直？为何要重画几次？ 防止色素带的重叠；增加色素量，使色素带的颜色更深一些。