四β内酰胺类抗生素.pptVIP

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 4.2.3 青霉素的发酵生产 2.菌种保存 青霉素生产菌种一般在真空冷冻干燥状态下，保存其分生孢子。也可以用甘油或乳糖溶液作悬浮剂，在-70℃冰箱或液氮中保存孢子悬浮液或营养菌丝体。对冷冻营养菌丝体进行保存可避免分生孢子传代时可能造成的变异，一般来说，分生孢子传代比菌丝传代更容易发生变异。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 4.2.3 青霉素的发酵生产 3.青霉素的发酵生产 （1）发酵生产流程 4.2.3 青霉素的发酵生产 在沉没培养条件下，青霉素产生菌在生长发育过程中，其细胞会明显的变化，按其生长特征可以划分为六个生长期：第Ⅰ期——分生孢子发芽，孢子先膨胀，再形成小的芽管，原生质未分化，有小空胞；第Ⅱ期——菌丝增殖，原生质的嗜碱性很强，在Ⅱ期末有类脂肪小颗粒；第Ⅲ期——形成脂肪粒，积累贮藏物，没有空胞，原生质嗜碱性仍强；第Ⅳ期——脂肪粒减少，形成中小空胞，原生质嗜碱性减弱；第Ⅴ期——形成大的空胞，其中含有一个或数个中性红染色的大颗粒，脂肪粒消失；第Ⅵ期——细胞内看不到颗粒，并出现个别自溶的细胞。 4.2.3 青霉素的发酵生产 （2）工艺要点 生产孢子的制备：将砂土孢子用甘油、葡萄糖和蛋白胨组成的培养基进行斜面培养后，移到大米或小米固体培养基上，于25℃培养7天，孢子成熟后进行真空干燥，并以这种形式低温保存备用。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ②生产种子的制备：种子制备时以每吨培养基不少于200亿孢子的接种量，接种到以葡萄糖、乳糖和玉米浆等为培养基的一级种子罐内，于(27±1)℃培养40h左右，控制通气量为1∶3m3/(m3·min)，搅拌转速为300～350r/min。一级种子长好以后，按10%接种量移种到以葡萄糖、玉米浆等为培养基的二级种子罐内，于（25±1)℃培养10～14h，便可作为发酵罐的种子。培养二级种子时，通风比为（1∶1）～（1∶5）m3/(m3·min)，搅拌转速为250～280r/min。 4.2.3 青霉素的发酵生产 种子质量要求：菌丝稠密，菌丝团很少，菌丝粗壮，有中小空胞，处在第Ⅲ～Ⅳ期。在最适生长条件下，到达对数生长期时菌体量的倍增时间约为6～7h。菌种保存时间过长、上一级种子生长不良、原材料质量发生波动等，都将影响菌体生长速度，使倍增时间延长。在工业生产中，培养条件及原材料质量均应严格控制，以保持种子质量的稳定性。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ③发酵生产 4.2.3 青霉素的发酵生产 （3）影响发酵产率的因素及发酵过程控制 ①基质浓度的影响 目前，糖浓度的检测尚难在线进行，故葡萄糖的流加不是根据糖浓度控制，而是间接根据pH值、溶氧或CO2释放率予以调节。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ②前体的影响及控制 苯乙酸或其衍生物苯乙酰胺、苯乙胺、苯乙酰甘氨酸等均可作为青霉素G的侧链前体。青霉菌可将前体直接结合到产物分子中，也可作为养料和能源利用，即氧化为二氧化碳和水。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ③pH值的影响及控制 青霉素发酵的最适pH值，一般认为是6.5～6.9，应尽量避免超过7.0，因为青霉素在碱性条件下不稳定，容易加速水解。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ④温度的影响及控制 青霉素发酵的最适温度随所用菌株的不同可能稍有差异，对菌丝生长和青霉素合成来说，最适温度是不一样的。一般生长的适宜温度为27℃，而分泌青霉素的适宜温度是在20℃左右。 生产上采用变温控制法，使之适合不同发酵阶段的需要。 康斯坦丁尼德斯(Constantinides)等对青霉素分批发酵进行了研究和计算，并以所得数据进行发酵试验：开始56h维持在272℃，然后直线下降到187℃维持到184h，最后24h回复到272℃培养。采用这种变温培养方法比常温25℃培养，可增加16%产量。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ⑤溶氧的在线控制 对于青霉素发酵来说，溶氧浓度是影响发酵过程的重要因素。当溶氧浓度降到30%饱和度以下时，青霉素产量急剧下降；低于10%饱和度时，则造成不可逆转的损失。发酵液中溶氧浓度过高，说明菌丝生长不良或加糖率过低，使呼吸强度下降同样影响生产能力的发挥。 溶氧浓度是氧传递与氧消耗的动态平衡点，而氧消耗与糖消耗成正比，故溶氧浓度也可作为葡萄糖流加控制的参考指标之一。 4.2.3 青霉素的发酵生产 ⑥补料的影响及控制 发酵过程中除以中间补糖控制糖浓度及pH值外，补加氮源亦可提高发酵单位。在基础料中加入0.05%尿素，并在补糖时再补加二次尿素，可以扭转发酵液浓度转稀、pH值低和单位增长慢的情况。 在发酵过程中与料液一起补入表面活性剂如新洁尔灭50×10-6，或聚氧乙烯、山梨糖