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杭州迪安医学检验中心有限公司 Hangzhou Dian Medical Testing Center Co., Ltd.文件编号:DA-SOP-IO-XXX
杭州迪安医学检验中心有限公司 Hangzhou Dian Medical Testing Center Co., Ltd.
版本Version:第5/0版
文件名称(生效日期:2013年*月*日) page PAGE 4 of NUMPAGES 7
迪安诊断
胸腹水染色体检测标准操作规程
(版本号Version:第5/0版)
2013年 * 月 * 日颁布实施
编制(Editor):
审核(Checker):
批准(Approver):
修订履历(Revision History)
版 本
(Version)
修订日期
(Revision Date)
修订人
(Revised)
修订内容
(Amended)
批准人
(Approver)
批准日期
(Approval Date)
目的:
规范染色体室胸腹水染色体检查实验操作,保证胸腹水染色体检查分析工作的顺利进行
实验原理 :
胸腹水中含有的脱落细胞可通过秋水仙素抑制其纺锤丝的形成,使细胞分裂停止于中期,低渗处理使有核细胞膨胀后进行滴片固定获得分散的染色体,滴片固定、Giemsa染色体的方法染色,计数多倍体比例。
3.适用系统:
3.1人员:适用于所有进行胸腹水染色体检查分析技术人员;
3.2仪器:染色体核型分析系统;
电子显微镜(OLYMPUS BX43 BX51、BX41、CX21)
4.试剂:
4.1成品试剂
4.1.1 衢州巨化试剂有限公司 甲醇(规格:500mL/瓶 分析纯);
4.1.2 杭州化学试剂有限公司 冰乙酸(规格:500mL/瓶 分析纯);
4.1.3 湖州湖试化学试剂有限公司 磷酸氢二钠(规格:500g/瓶 分析纯);
4.1.4 湖州湖试化学试剂有限公司 磷酸二氢钾(规格:500g/瓶 分析纯);
4.1.5 宁波化学试剂有限公司 氯化钾 (规格:500g/瓶 分析纯)。
4.2 自配制试剂
4.2.1 低渗液 2.8g KCL + 500ml 蒸馏水(4℃
4.2.2 固定液 乙酸:甲醇 = 1 :3 (常温现配现用)
4.2.3 胰酶 0.25% 胰酶 250mg胰酶粉剂 +100ml Hank’s液(磁力搅拌,每瓶10ml,-20℃
4.2.4 秋水仙碱 秋水仙碱粉末 100mg + 蒸馏水 50ml(原液)
1ml 原液 + 100 ml NaCL(应用液,4℃
4.2.5 HanK’液(4℃
NaCL
KCL
Na2HPO4·12H2O
GLU
KH2PO4
1%酚红
8g
0.4g
150mg
1g
60mg
2ml
加蒸馏水至1000ml
4.2.6 麦氏缓冲液()
A液 35.8g Na2HPO4 + 500 ml H2O (0.2 M)
B液 10.507 g 柠檬酸钠 + 500 ml H2O (0.1M)
4.2.7 Giemsa染液储存液 Giemsa燃料粉剂 1g + 500ml 甲醇(常温避光保存)
4.2.8 Giemsa染料应用液 麦氏缓冲液:蒸馏水:染料储存液=12:8:7(常温现配现用)
保存条件
外周血淋巴细胞培养基保存于-20℃冷冻环境,甲醇常温保存于避光处,其余成品试剂常温保存;自配制试剂保存条件见
5.标本要求
5.1 标本类型:无菌穿刺采集的胸腹水。
5.2 标本采集:胸腹水标本可在采集后注入经过高压灭菌的旧生理盐水注射液瓶中,并用75U/mL的肝素钠抗凝。
5.3 标本验收:有人为污染现象的标本;经冷冻、高温环境中放置的标本;或接收时距标本采集时间超过10
小时的标本视为不合格标本。
5.4 标本储存:常温18-28℃
5.5 标本接收:
5.5.1 样本室接收染色体标本。
5.5.2 核对申请单上的各项内容是否均填写完整,尤其是姓名、年龄、性别、临床病史、临床诊断、
采集时间等,对填写不完整的申请单,应及时和客服交接,由客服及时联系客户,补充缺项。并同时检查
标本是否符合要求(见5.2标本验收),对不符合要求的标本,及时退还,并填写退单通知单。
5.6 标本的处理:操作完成后剩余标本即丢弃
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