园艺植物育种学实验指导书(2013.3).docVIP

PAGE PAGE 20 园艺植物育种学总论 实验指导书 黄桂香 编著 广西大学农学院园艺系 2013年3月 目 录 实验一 园艺植物花粉生活力测定(3h)………………………………… 3 （一）果树花粉生活力测定………………………………………………3 （二）蔬菜花粉生活力测定………………………………………………6 实验二、三 园艺植物开花习性观察及有性杂交育种(6h) ……………7 （一）果树开花习性观察及有性杂交育种………………………………7 （二）蔬菜开花习性观察及有性杂交育种………………………………8 实验四、园艺植物品种描述及鉴别(3h)…………………………………10 番茄品种描述及鉴别………………………………………………10 荔枝品种描述及鉴别………………………………………………13 实验五、种胚分离培养技术(3h)…………………………………………16 实验六、园艺植物选择育种(3h)…………………………………………17 实验七、园艺植物品种调查及育种方案的制订(6h)……………………20 实验八、园艺植物花粉单核期观察(3h)…………………………………20 实验一、园艺植物花粉发芽试验及生活力测定 内容一：果树花粉发芽试验及花粉生活力测定 一、目的要求 练习并掌握果树花粉发芽试验及花粉生活力测定技术 二、材料用具 供试花粉、氯化钙、硼酸、琼脂、蔗糖、凹玻片、棉花、染色瓶、蒸馏水、显微镜、计数器、天平、载玻片、盖玻片、烧杯、镊子、水浴锅、玻璃杯、玻棒、冰箱、温箱、干燥器等。联苯胺、α—萘酚、碳酸钠、酒精、过氧化氢、氯化三苯基四氮吡、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、量筒、量瓶、滴瓶等。 安全提示：因联苯胺、α—萘酚、氯化三苯基四氮唑为易制毒化学品，操作时要按规范要求，避免人体直接接触，注意安全。 三、说明 在有性杂交工作中，常因杂交亲本组合的花期不遇，或亲本植株异地而必须预先收集父本花粉，花粉应贮藏在低温(0—4℃)，干燥(相对湿度0—4%)不受阳光直射(或黑暗) 花粉人工发芽的效果与培养基的配制是否适合有很大关系，培养基常用不同浓度的蔗糖和琼脂1%及蒸馏水配制而成，不同果树的花粉对蔗糖浓度要求不同。一般柑桔花粉要求蔗糖浓度以10—15%为宜；苹果及梨以10—15%为宜，桃以10%为宜。通过控制蔗糖浓度的高低可调节培养基的渗透压，防止播种的花粉在培养基上发生破裂现象。培养基一般以微酸性为宜，pH值相应调整在6—5.2之间，发芽温度控制在20—25℃，并需要空气和较高的湿度。如在培养基中加入少量的硼酸和维生素B1 测定花粉生活力，同样是检查花粉的质量，因为做花粉发芽试验时，操作较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速地测定花粉的生活力，也有用化学染色的方法测定花粉生活力，但此种方法有一个很大的缺点，就是不能真实地反映出有发芽力的花粉究竟有多少，因为即使染上色的花粉也不一定都具有生活力。所以一般常用而且较为可靠的方法仍然是采用花粉发芽试验，而染色法作为一种粗略的快速测定，还是比较简便的。 四、方法和步骤 (一)花粉发芽试验 (1)培养基的配制：在100毫升蒸馏水中，加入琼脂1克，蔗糖(按果树花粉种类不同的比例加入)和0.01g的硼酸共同置于烧杯中加热煮沸，使琼脂和蔗糖等充分溶解于水中，在加热过程中，由于水分蒸发，必须加入失去的水分，才能保持准确的浓度，然后将烧杯置于水浴锅中(或盛热水的烧杯中) (2)发芽床的装置：用玻棒将冷却前(约50℃)的培养基滴入凹玻片的凹孔中(1—2滴) (3)播种花粉用接种丝或头发沾上花粉(花粉事先收集使之干燥，贮藏于干燥器中置于冰箱内)少许，均匀地播种于培育基表面，播种时要防止花粉成团堆集于培育基上；也要防止花粉埋入培养基过深，影响花粉发芽。播种后要在显微镜下检查，花粉分布是否均匀。花粉堆积过多难以计数，而过少则影响发芽。以每一视野中（10×10）分布有100—200粒左右花粉为宜。播种完毕后，将凹玻片插入染色瓶中(染色瓶底事先放入少量的脱脂棉，并加入适量的无菌水)，盖上瓶盖。再在染色瓶上贴上标签，注明花粉种类，蔗糖浓度，采集时间，播种时间，工作者姓名等。然后置于温箱中（温度调至25—28℃ (4)播种后的检查：播种根据树种不同，隔不同时间在显微镜下，检查花粉发芽情况、苹果、梨、桃在3—4小时后检查第一次，以后每隔2—4小时检查一次（北方可适当缩短2次之间的时间），柑桔在24小时检查一次。每次检查三个视野（最好能固定视野检查。如不能固定视野检查，则每次检查的视野不能重复）。同时用计数器统计出花粉总粒数及发芽粒数，直至花粉粒数不再增加为止，花粉发芽标准，以花粉管伸长超过花粉直径为准。 表一 花粉发芽记载表 供试品种 收集时间 播种时间 蔗糖浓度 第一次 第二次 第三次 总发芽率%