第六章 多底物酶促反应动力学.pptxVIP

多底物酶促反应动力学;国际酶学委员会把酶六大类反应对应于底物的分类如下： ;单底物反应动力学指1,3, 2的正向反应(约40%) 其余多底物反应多为多底物反应(约60%);中心复合物： 指酶活性中心全部被底物占居 命名：（EAB-------------------------EPQ） E: 稳态酶， EAB和EPQ:中心过渡态中间物 ;1) 有序顺序反应： xxxxxxx-------- 底物、产物 规定： 反应历程 OOOOOOO------酶存在形式  ; ;还有其酶促反应，中心过渡态络合物形成很慢，而分解速度很快。被称为Theorell Chance反应：即形成中间物的速度极慢而分解速度极快。 A B P Q E EA EQ E ; ;2.随机顺序反应（Randan BiBi）：; ;谷丙转氨酶的作用： 谷氨酸 α-酮戊二酸 丙酮酸 丙氨酸 E (E-谷氨酸-F-α-酮戊二酸) F ( F-丙酮酸-F-丙氨酸) E ;底物动力学方法： 有序顺序机制推导法是用图象法推出。 在稳态条件下推出的双底物反应速度公式： V[A][B] V= KmB[A] + KmA[B] + KiaKmB + [A][B] 是底物A与酶E结合的解离常数。 ;解释公式中几个常数： 多底物反应中，一底物的米氏常数 可随着另一底物浓度变化而变化。 KmA[B]：指底物[B]浓度达饱和，底物 A的米氏常数。在底物B低于饱 和 浓度时，测得随底物[B]而变化的A 的各个Km，称为表观米氏常数Km KmB[A]: 指底物[A]浓度达饱和，底物 B的米氏常数。在底物A低于饱和 浓度时，测得随底物[A]而变化的B 的各个Km，称为表观米氏常数Km;1 K mB[A] KmA[B] Kia KmB [A][B] = + + + v Vm[A][B] Vm[A][B] Vm[A][B] Vm[A][B] ? 1 K mB KmA Kia KmB 1 = + + + v Vm[B] Vm[A] Vm[A][B] Vm 1 KmA 1 1 当B=∞, = + V Vm [A] Vm ? 1 KmB 1 1 当A=∞, = + V Vm [B] Vm;具体实验方法： 以A、B双底物反应作为例子，可将底物B固定在几个不同浓度下。 固定在某一B浓度时，测不同A浓度对反应速度影响； 也可固定A在某一浓度，测定不同B浓度对反应速度影响，再分别作双倒数图。;Lineweaver-Burk双倒数作图： 当固定几个不同的B浓度或者几个不同的A浓度时，作1/[A] ---1/v 和1/[B ] ---1/v的关系图，得到如下图。;直线的交点在坐标的左侧，这是顺序机制的特点。 且交点可在横坐标的的上方、下方或者线上。 1. 在横坐标上面，表明固定底物B或A与酶结合 不影响 可变底物A或B的Km，即B或A浓度 大小互不影响各自的Km,说明表观 Km app= Km,KmA=Kia, KmB=Kib 2. 在横坐标下方，表明可变底物A的表观 Km 随 B的增加 而增加，KmA＜Kia，KmB＜Kib 3. 在横坐标上方，表明可变底物A的表观 Km 随 着B的增加