一氧化氮对灵芝木质素和多糖含量影响探究.docx

一氧化氮对灵芝木质素和多糖含量影响探 摘 要：采用硝普钠(Sodium nitroprusride, SNP) 作为外源一氧化氮(nitric oxide, NO)供体，研究一氧化 氮对灵芝产量、木质素和灵芝多糖含量的影响。结果表明， 5mmol/L SNP处理促进灵芝子实体生长，并显著提高灵芝多 糖含量，降低木质素含量；当SNP处理浓度达到20mmol/L 时，将抑制灵芝多糖的积累。 关键词：灵芝；一氧化氮；木质素；灵芝多糖 中图分类号S646文献标识码A文章编号1007-7731 (2013) 14-19-02 灵芝是一种药食兼用真菌，在我国有着悠久的应用历 史。灵芝子实体具有抑制肿瘤、抗血栓形成、防止动脉硬化、 提高人体免疫力、镇痛及延迟细胞衰老等功效［1-3］,其主 要含有多糖和灵芝酸等其他有效化学成分［4］。与猴头菇、 灰树花、姬松茸等肉质化的食药用真菌子实体相比，灵芝子 实体含有高达70%以上的纤维素和木质素，使得其不能直接 食用，只能通过适当的提取工艺提取多糖和灵芝酸等有效药 用成分。然而，提取过程复杂，且有效成分有损失、提取不 完全，从而大大限制了子实体的药用价值和灵芝产业发展。 因此，如何降低灵芝木质素含量一直是灵芝产业所关注的重 要课题。本文采用生物信号分子一氧化氮（NO）供体硝普钠 作为灵芝子实体生长过程中次生代谢产物调节剂，研究一氧 化氮对灵芝木质素和多糖含量的影响。 1材料与方法 1. 1材料灵芝菌种（Ganoderma lucidum）由上海农科 院食用所提供。蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、乙醇、蛋白脓、 葡萄糖、硝普钠（Sodiumnitroprusride, SNP,购自 Sigma 公司）、氢氧化钠、3, 5-二硝基水杨酸、浓硫酸、琼脂、苯 酚、酒石酸钾钠、无水硫酸钠。 1.2仪器与设备JA2003N型电子分析天平、756-MC型 可见分光光度计、YXQ-LS50S11立式压力蒸汽灭菌器、 HZ-300L恒温摇床、HH ? B11 ? 420-S电热恒温培养箱、 TGL-16G高速台式离心机、HH-6恒温水浴锅,SW-CJ-2FD双 人单面净化工作台、XHF-D高速分散器、北京博医讯冷冻干 燥机。 1. 3方法 1.3. 1灵芝栽培与处理采用棉籽壳44%,杂木屑44%, 隸皮5%,玉米粉5%,蔗糖1%,石膏粉1%配方配制培养基。 选用500mL罐头瓶栽培，每瓶装干料150g,常规灭菌接种后, 于251左右条件下培养，经20d发菌培养，当菌丝长至1/2 瓶时，可以除去封口纸，搬至子实体发生室。此时控温25? 28°C,相对湿度增至90%?95%,保持空气清新，增强漫射光。 待长出菇蕾时每隔4d用0、0.5、1、5、10、20mmol/L浓度 的硝普钠(N0供体)进行表面喷施，每组重复10瓶，共处 理10次。在弹砲期后采收子实体，并测定相关指标。 1.3.2木质素含量测定 子实体于6CTC烘箱烘干后務 碎，过40目筛后，用于测定灵芝木质素含量。木质素含量 的测定参照鞠志国等的方法［5］。按1 ： 10 (W/V)加入沸水, 冷却后加入86%硫酸25mL,室温下充分搅拌4h,加入250mL dH20煮沸lh,冷却后用烘干至恒重的砂芯滤斗抽滤，用6(TC 热dH20洗涤至洗液与10%BaC12反应时不出现沉淀为止，砂 芯滤斗烘干后称重。按以下式计算木质素含量： 木质素(%)=［(抽滤后漏斗重-抽滤前漏斗重)/样品 重］X 100 1.3.3灵芝多糖提取与含量测定(1)灵芝多糖提取。 采集子实体，6(TC烘箱烘干后粉碎，过40目筛后，用于测 定灵芝多糖含量。称取0. 100g,加入5mLlmol/L NaOH, 60°C 水浴lh,然后6 OOOrpm离心10min,取上清液，得多糖样 品粗提液。再用Sevag法除去蛋白，在4*用去离子水透析 24h、60°C旋转蒸发器浓缩、-45°C真空冷冻干燥36ho (2) 灵芝多糖含量的测定。称取标准葡萄糖10mg,用蒸馅水定容 至250mL制成40 u g/mL葡萄糖标准液。取试管分别加入0、 0.2、0.4、0.6、0.8、l.OmL葡萄糖标准液，用ddH20补齐 至 2. OmL；加入 6. 0%苯酚、ImL ddH20、98%浓硫酸 5. OmL。 混匀后于485nm测定光密度值。以葡萄糖含量（ug）为横 坐标（x）,光密度值为纵坐标（y）,作出葡萄糖标准曲线 y=0. 009 lx-0. 006 7, R2=0. 993 6O 取 0. ImL 多糖提取液， 加入 1. 9mL ddH20、6. 0%苯酚、ImL ddH20、98%浓硫酸 5. OmL, 混匀后于485nm测定光密度值。按标准曲线计算多糖含量。 1.3.4灵芝产量测定 在弹胞期后采收，用