培养基灭菌的目的和要求.ppt

2. 连续灭菌流程 连续灭菌优点： （1）提高产量； （2）产品质量较易控制； （3）蒸汽负荷均衡，锅炉利用率高，操作方便； （4）适宜采用自动控制； （5）降低劳动强度。 实际操作： 高温灭菌时间约为15~30s，然后根据发酵类型不同在维持罐维持8~25min。 2、连续灭菌流程及设备 即在培养基输送至发酵罐的同时进行加热、保温和冷却而进行的灭菌。 （1）连消塔-喷淋冷却连续灭菌流程 （1）配料预热罐，将配好的料液预热到60~70℃，以避免灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声； （2）连消塔，是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液的温度很快升高到灭菌温度（126~132℃）； （3）维持罐，维持料液温度，延长灭菌时间 （4）冷却管，生产上一般采用冷水喷淋冷却，冷却到40~50℃后，输送到预先已经灭菌过的罐内。 培养液连续灭菌流程 （2）喷射加热-真空冷却流程 喷射加热器以较高速度自喷嘴喷出，借高速流体的抽吸作用与蒸汽混合 管道维持器：维持灭菌时间 真空闪急蒸发室：由膨胀阀进入，因真空作用使水分急骤蒸发而冷却到70~80℃左右，再进入发酵罐冷却到接种温度。 优点：加热和冷却在瞬间完成，营养成分破坏最少，可以采用高温灭菌，把温度升高到140℃而不致引起培养基营养成分的严重破坏。设计得合适的管道维持器能保证物料先进先出，避免过热。 缺点：受压力影响， 出料泵 （2）喷射加热-真空冷却流程 （3）板式换热器灭菌流程 采用薄板换热器作为培养液的加热和冷却器，培养液在设备中同时完成预热、灭菌及冷却过程，蒸汽加热段使培养液的温度升高，经维持段保温一段时间，然后在薄板换热器的另一段冷却，从而使培养基的预热、加热灭菌及冷却过程可在同一设备内完成。 优点：灭菌的温度较高，灭菌时间较短，培养基的营养成分受破坏的程度较低，从而保证了培养基的质量；设备的利用率高； 缺点：过程所需的设备较多，操作较为麻烦，染菌机会也相应较多 * * 动画 * * 动画 * 动画 * 动画 培养基灭菌的目的和要求 目的：杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 要求：达到要求的无菌程度(杂菌污染降低到被处理的每1000罐中只残留1个活菌的程度,10-3个/罐）；尽量减少营养成分的破坏。 在灭菌过程中，培养基组分的破坏是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。 灭菌的方法 化学法 化学药品灭菌法：甲醛、苯酚等 物理法 干热灭菌法 湿热灭菌法（生物工程工业常用方法） 射线灭菌法 1. 湿热灭菌原理和影响灭菌的因素 湿热灭菌的原理：主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质，如酶等，发生凝固、变性，从而导致微生物无法生存而死亡。 致死温度与致死时间：杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。 微生物的热阻和相对热阻：前者是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。后者是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 各种微生物对湿热的相对热阻 微生物 相对热阻 营养细胞和酵母 1.0 细菌芽孢 3×106 霉菌孢子 2~10 病毒和噬菌体 1~5 某些微生物的相对热阻 灭菌方式 大肠杆菌 霉菌孢子 细菌芽孢 噬菌体或病毒 干热灭菌 1 2-10 1000 1 湿热灭菌 1 2-10 3×105 1-5 苯酚 1 1-2 1×109 30 甲醛 1 2-10 250 2 紫外线 1 5-100 2-5 5-10 湿热灭菌的优点 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； 蒸汽有很大的潜热； 操作方便，易管理。 1.1 湿热灭菌的理论基础 将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数N（10-3），需要多高的温度、多长的时间为合理。 灭菌温度和时间的确定取决于： 杂菌孢子的热灭死动力学 反应器的形式和操作方式 培养基中有效成分受热破坏的可接受范围 微生物的热死灭动力学方程：对数残留定律 微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学，即： N-任一时刻的活细菌浓度，个/L； t-时间，min； K-比热死速率常数，min-1，越小越耐热 细菌孢子的热死灭动力学与营养细胞的有所不同。它表现为非对数的死亡动力学。但当温度超过120?C时，热阻极强的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的热杀灭动力学也接近对数死亡动力学即符合一级反应规