反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素C(精).docVIP

-毒理与检验-反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素C 李小娟杨润 (江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 [文献标识码I C[中图分类号I R-331[文章编号I1006-9070(200401-0060-02 [关键词I保健食品G维生素C G反相高效液相色谱法G测定 维生素C是人体维持生长保证健康所必需的营养物质许多保健食品中都含有目前国内测定维生素C的方法有2 4 二硝基苯肼法~荧光光度法及液相色谱法[1-2]前两种方法试样前处理比较复杂后一种方法由于各种样品基体不同干扰因素不同及检测条件不完善通常应用不多但检测条件是分离效果的关键我们通过摸索条件建立了反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素C平均回收率为94.7~101.3%相对标准偏差为4.6~6.1%最低检出浓度为0.001mg/m1该方法灵敏~快速~准确 1材料与方法 1.1仪器~PLC GO1d 125型高效液相色谱仪配有168型检测器及色谱工作站超声清洗机 1.2试剂甲醇(色谱纯~抗坏血酸(A.R.中国医药集团上海化学试剂公司~磷酸二氢钾(A.R 1.3色谱条件ODS色谱柱:dp5pm 4.6 150mm(美国Beckman公司检测波长:254nm G 20p1定量取样环G流动相:甲醇=0.05M磷酸二氢钾(p~为3.0=2=98G流速:0.8m1/min 1.4测定方法 (1标准溶液:用0.05M磷酸二氢钾(p~为3.0溶液配制1mg/m1的维生素C标准储备液再稀释成0.02mg/m1标准液按上述色谱条件进样20p1保存相应色谱图及峰面积 (2样品处理:精密称取保健食品0.5~2.5g 于50m1比色管中用0.05M磷酸二氢钾(p~为 3.0溶液稀释至刻度混匀超声10min用0.45pm滤膜过滤收集滤液进样20pL保存相应色谱图及峰面积 (3计算:以保留时间及峰面积定性和定量以标准与样品保留时间定性G用标准比较法确定样品中维生素C的含量其计算公式为:Ci=AiCsi/ Asi其中Ci~Csi分别为样品及标准品的浓度G Ai~ Asi分别为样品及标准品的峰面积 2结果与讨论 2.1色谱条件选择本文对流动相的配比进行了选择流动相中甲醇与0.05M磷酸二氢钾(p~为 3.0的比例分别为20=80~10=90及2=98进行实验发现维生素C标准峰随着流动相中甲醇含量的降低其保留时间逐渐推迟对样品来说由于其基体比对照品复杂保留时间的推迟有利于其组份的分离当选择配比为2=98时其组份基本分离标准出峰时间Rt=5.4min 2.2线性范围~最低检出限将标准储备液用0.05M磷酸二氢钾(p~为 3.0溶液稀释成0.005~ 0.01~0.02~0.04~0.08mg/m1标准系列在规定的色谱条件下进行分析以峰面积对其含量进行线性回归得回归方程:y=-0.51+106 4.9:(1= 0.9997结果表明维生素C含量在0.001~ 0.08mg/m1范围内呈良好的线性关系最低检出浓度为0.001mg/m1 2.3精密度试验同一试样在相同条件下进行5次测定相对标准偏差在4.6~6.1%结果见表1 2.4准确度试验在已知含量的样品中加入2个浓度水平的标准品溶液测定加标回收率见表2 结果说明本方法较准确 -06 -江苏预防医学2004年3月第15卷第1期JiangsU Prev Med March2004 VO115 NO.1 收稿日期:2003-10-14 作者简介:李小娟(1967 女江苏南通人副主任技师 表1精密度试验结果(mg/g D 试样编号12345I RSD% 1 1.2 2 1.36 1.24 1.32 1.25 1.28 4.6 2O.O68O.O71O.O78O.O69O.O76O.O72 6.1 表2准确度试验(H=3D 样号本底值(mg D加入值(mg D 测定值(mg D 123 平均值(mg D回收率(%D 1O.64O O.273O.9O9O.89O O.897O.89994.7 2O.64O 1.3O8 1.973 1.965 1.957 1.9651O1.3 3小结 利用反相高效液相色谱(HPLC D法测定保健食品中的维生素C,采用ODS柱,以甲醇=O.O5M磷酸二氢钾(pH为3.OD(体积比为2=98D为流动相,用紫外检测器检测O结果表明,维生素C浓度在O.OO1~O.O8mg/m1范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率94.7~1O1.3%,相对标准偏差为4.6~6.1%,最低检出浓度为O.OO1mg/m1O该法简单快速,精密度及准确度均符合分析要求,适用于维生素C片剂~银杏强化果晶~初乳粉等保健食品中维生素C含量的测定O [参考文献I [1I中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所.食品营养成分测定法[M I.北京:人民卫生出版社,19