中药夏枯草对甲状腺癌SW579细胞的抗增殖作用.docxVIP

中药夏枯草对甲状腺癌SW579细胞的抗增殖作用 蒙雯雯1黄雪梅2卢德成1 （通讯作者）罗佐杰1 （1广西医科大学第一附属医院内分泌科广西南宁530021） （2南宁市第一人民医院内分泌科 广西南宁530021） 【摘要】目的探讨中药夏枯草对甲状腺癌细胞的抗增殖作用。方法不同浓度的 夏枯草作用于人甲状腺鳞癌SW579细胞48h后，采用MTT法计算出夏枯草对 SW579的半数抑制浓度（IC50）；将实验分为夏枯草0.5IC50组、IC50组、2IC50 组、阴性对照组组四个组，将各浓度组药物分别作用于SW579细胞48h后，倒 置相差显微镜下观察各组药物作用于SW579后细胞的形态学变化；Western blot 检测各组c?nnyc蛋白的表达。结果 夏枯草对SW579细胞的IC50为21mg/ml； 且随着药物浓度的增加，抗增殖作用增强；c-myc蛋白的表达随着药物浓度的增 加，表达量减少。结论夏枯草能有效抗甲状腺癌细胞的增殖，为中药治疗甲状 腺癌提供理论依据。 【关键词】夏枯草甲状腺癌细胞c-myc细胞增殖 【中图分类号】R242【文献标识码】A【文章编号]2095-1752 （ 2012 ） 08-0074-03 甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一 [1]0夏枯草在临床上应 用己经有很久的历史，具有清热解毒、软坚散结等功效，现代中医临床及实验研 究表明，夏枯草对食管癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤具有较好的临床 疗效。硏究表明，抗肿瘤细胞增殖与诱导细胞凋亡是夏枯草抗肿瘤作用机制之一 ⑵。原癌基因c?myc及其表达产物在细胞增殖、分化、转化和诱导细胞凋亡等 多个环节起到调节作用，在多种肿瘤形成过程中处于重要地位[3,4], c?myc的过 度表达是许多肿瘤的特征。木实验研究以甲状腺癌SW579细胞为研究对象，初 步探讨不同浓度的夏枯草对甲状腺癌SW579细胞的抗增殖作用及细胞内c-myc 蛋白的表达情况。 1材料和方法 1.1实验材料 甲状腺癌SW579细胞购自中科院上海细胞所。主要试剂及配制：夏枯 草提取物：夏枯草40g加水400ml,煮沸30min后过滤除渣，此吋滤液浓度为 lg/ml,经120°C 30min高压灭菌后，用直径0.22mu;l的微孔滤膜正压过滤， 使用时用L?15培养基稀释至所需浓度。培养基L?15培养基购自博士德生物公司， 胎牛血清购自杭州四季青生物公司,兔抗人c-myc抗体购自Cell Signaling公司, 辣根过氧化酶标记山羊抗兔IgG购自Santa Cruz公司，beta;-actin单克隆抗体 购自上海康成有限公司，垂直电泳槽及电转槽为美国Bio-Rad公司，酶标仪为美 国 Bio-Rad iMARKo 1.2方法 1.2.1细胞培养及实验分组 人甲状腺癌SW579细胞于含10%胎牛血清的L-15培养基中培养，置于 37°C无CO培养箱内培养。实验组分4组：低浓度组：浓度为0.5IC50的夏枯草 提(2)取液；中浓度组:IC50夏枯草提取液；高浓度组：该组药物浓度为2IC50 夏枯草提取液；阴性对照组：培养液中只有细胞无药物。 1.2.2夏枯草IC50的计算 将处于对数生长期的细胞消化后制成单细胞悬液，密度为8times;10 4 个/ml接种于96孔板中，100mu;l/?Lo细胞培养24 h后，加入夏枯草提取液, 使夏枯草终浓度为2, 20, 40, 80, 200mg/mL 48 h后倒置相差显微镜下观察细 胞的形态，用PBS小心漂洗2次，每孔加入完全培养基100mu;l, MTT10mu;L 继续培养4 h后吸弃上清，每孔加入DMS0100mu;l,于全自动酶标仪上震荡 lOmin使结晶完全溶解，在波长490nm下测定吸光度A值，按下列公式计算细 胞的增殖抑制率：细胞增殖抑制率二(1 —实验组A/对照组A) times;100%。计 算出两种药物的半数抑制浓度IC50o MTT法检测各药物组细胞增殖抑制率MTT法检测药物处理48 h后 低浓度组、中浓度组、高浓度组、阴性对照组中细胞的增殖抑制率，倒置相差显 微镜下观察细胞生长状态。 Western blot检测c-myc表达情况分别收集各浓度组细胞，约 ltimes;10 6个细胞加入100mu;l裂解液，冰上吹打裂解30mino4°C, 12000r/min, 离心30min,小心吸取上清液即为细胞总蛋白提取液。测定蛋白浓度，依据蛋白 浓度上样，SDS PAGE凝胶双向电泳，将胶上蛋白电转移至硝酸纤维膜上，以兔 抗人c?myc抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG为二抗，以 beta;-actin为内参，进行免疫印迹分析，ECL显色于胶片上,Quantity one图像 分析软件进行定量分析。 1.3统计学处理采