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人源肠内菌转化通脉方化学探究 ［摘要］研究人源肠内菌转化‘通脉方”的化学 成分。采用硅胶、Sephadex LH-20、半制备性高效液相等柱 色谱和重结晶等方法进行分离纯化，根据MS和NMR等谱学 数据鉴定化合物的结构。分离鉴定了 26个化合物，分别为 苯丙酸（1）、6〃 -0-乙酰基葛根素（2）、芒柄花素（3）、大 豆昔元（4）、对務基苯丙酸（5）、呵噪-3-丙酸（6）、染料 木素（7）、异芒柄花素（8）、异芒柄花昔（9）、（-）-野葛 醇B-2〃 -0-毗喃葡萄糖昔（10a）和（+ ） -野葛醇B-2〃 -0- 毗喃葡萄糖昔（10b）混合物、8-释基大豆昔元（11）、野葛 醇A （12）、3’ -甲氧基-6〃 -0-乙酰基葛根素（13）、6〃 -0- 乙酰基大豆昔（14）、3’ -甲氧基大豆昔（15）、野葛醇B（16）、 3-甲基尿囉唳（17）、染料木昔（18）、大豆昔（19）、3’ - 甲氧基葛根素（20）、葛根素芹菜糖昔（21）、獐芽菜苦昔（22）、 大豆昔元-7, 4 -0-双葡萄糖昔（23）、腺瞟吟（24）、3’ - 强基葛根素（25）和葛根素（26）。“通脉方”经人源肠内 菌生物转化，所含昔类化合物被转化为昔元和/或少糖基化 合物，亦包括務基化反应和脱甲基反应；昔类化合物是“前 药” o ［关键词］通脉方；人源肠内菌；异黄酮；葛根素；大 豆昔元；“前药 “通脉方”由葛根、丹参和川苇等3味中药按重量比 1 ： 1 ： 1组成，《中华人民共和国卫生部药品标准》?《中药 成方制剂》收载的制剂有“通脉冲剂” [1]和‘通脉口服 液” [2]。国家食品药品监督管理局（SFDA）批准的“通脉 颗粒”新药畅销市场，获批生产的药企有100余家。“通脉 方”具有活血通脉之功效，用于缺血性心脑血管疾病、动脉 硬化、脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛等。为将其二次开 发为精制通脉颗粒”，本课题组首先对由原生药组成的 “通脉方”的物质基础进行了研究，分离鉴定了 34个化合 物[3-4] o鉴于口服中药的某些化学成分在肠内可能由肠内 菌进行生物转化，然后吸收进入体循环发挥生物学作用 [5-7],本文采用人源肠内菌生物转化模型[7]对与前期研究 [3-4]同批次的“通脉方”进行生物转化，并研究转化产物 的化学成分，为其药效物质基础的确定和其质量标准的制定 提供实验依据。 1材料 1.1药品与试剂 人源肠内菌丛培养基材料主要为胰蛋 白月东、牛肉膏、牛肝浸出粉、消化血清粉、阮豚和L-半胱氨 酸盐酸盐（北京双旋微生物培养基制品厂），酵母浸膏购自 Unipath Ltd. （Balingstoke, Hampshire, England）,硫代 乙醇酸钠（广西新港化工厂），可溶性淀粉（成都宏博有限 公司），葡萄糖（北京化工厂）。 葛根、丹参和川苇药材（由神威药业有限公司提供）经 北京大学药学院杨秀伟教授鉴定，分别为豆科植物野葛 Pueraria lobata （Willd. ） Ohwi的干燥根、唇形科植物丹 参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎、伞形科植物 川苇Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，凭证标本 存放于北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室。 薄层色谱硅胶GF254 （青岛海洋化工厂产品），反相C18 硅胶板（Merck, Darmstadt, Germany）,聚酰胺薄膜和柱色 谱聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产），柱色 谱硅胶（青岛海洋化工厂产品）,Sephadex LH~20（Pharmacia, Fine Chemicals, Inc., Piscataway, N? J. , USA）, AB-8 大 孔吸附树脂（天津市海光化工有限公司产品）。 乙醇、甲醇、环己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、 石油瞇、丙酮等分析纯试剂均购于北京化工厂；娃哈哈纯净 水（杭州娃哈哈基团有限公司），用前过0.45 uni有机微孔 滤膜。薄层色谱检识用10%浓硫酸乙醇溶液和10%AlC13乙醇 溶液为喷雾剂，在紫外灯254, 365 nm波长下观察。 1.2仪器Bruker AVANCE III 400型超导核磁共振波谱 仪 （Bruker BioSpin AG Facilities , Fllanden , Switzerland）； 1H-NMR, 400 MHz； 13C-NMR, 100 MHz；四 甲基硅烷为内标。ESI-T0F-MS用MDS SCIEX API QSTAR型质 谱仪 （Applied Biosystems/MDS Sciex?，Foster City，CA, USA）测定；EI-MS 用 Finnigan TRACE 2000 型质谱仪（Thermo Fi