聚乙二醇引发对羊草种子活力的影响.DOCVIP

PAGE PAGE 1 基金项目：中国科学院重大研究项目（编号：KSCX1-08）。作者简介：刘杰（1963-），男，河北保定市人，博士，副研究员。 基金项目：中国科学院重大研究项目（编号：KSCX1-08）。 作者简介：刘杰（1963-），男，河北保定市人，博士，副研究员。 *:通讯作者 刘杰，汪恩华，李晓峰，齐冬梅，李芳芳，刘公社* （中国科学院植物研究所，北京 100093） 摘要：应用聚乙二醇（PEG-6000）引发法探讨了不同引发渗透处理，时间处理对羊草种子萌发及活力的影响，结果表明：以30% PEG处理羊草种子24小时，能显著提高羊草种子发芽率和幼苗活力， 降低萌发过程中的外渗电导率。在羊草种子萌发期间，经PEG处理的羊草种子，呼吸速率初始低于对照，之后迅速增加；超氧负离子（O2-）浓度明显降低，超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）的活性均显著增加；脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的积累量明显低于对照。经PEG引发引起的羊草种子活力升高与体内活性氧代谢的变化存在着一定的内在联系。 关键词：聚乙二醇（PEG）；活力指数；活性氧代谢；羊草种子 羊草又称碱草（Leymus chinensis (Trin.) Tzvel. 或Aneurolepidium chinensis(Trin)Kitag.）,是禾本科牧草之王，我国约占世界羊草总面积的一半，主要分布于东北平原、内蒙古高原的东部和中部、华北北部山区、黄土高原。羊草具有蛋白含量高、适口性好、适应性好、产草量高等特点， 牛、羊均喜食, 素有“牧草中的细粮”之称。[1]羊草草场是优良的天然放牧场和割草场，在目前北方草原改良和人工草地建设中，已成为大面积种植的主要优良牧草，在当前发展草原畜牧业、改善西部生态环境等方面具有举足轻重的地位。因此，加大科研投入，采用生物技术手段全方位开展对羊草的科学研究，已引起政府和越来越多研究者的关注[2,3]。由于羊草的人工驯化时间较短，野生性较强，使得羊草的结实率、发芽率、产草量偏低的“三低”问题长期得不到很好地解决，成为限制草原改良和人工草地建设的“瓶颈”。近年来，虽有一些研究报告报导了对羊草种子休眠机理及种子发芽特性的探讨 [4,5,6]，但仍缺乏近一步的研究资料。本文采用渗透调节剂聚乙二醇PEG-6000引发羊草种子，测定种子萌发过程中过氧阴离子（O2-）的含量、脂质过氧化物产物丙二醛（MDA）的积累，分析膜透性及有关活性氧清除酶的变化，对在渗透调节作用下羊草种子萌发过程中活性氧代谢与其相关酶类的活性和幼苗活力之间的内在联系进行了初步研究，旨在阐明PEG引发对促进羊草种子萌发和活力的效应，为解决羊草“三低”难题提供理论依据。 1材料与方法 1试验材料 供试羊草种子1998年采自中科院内蒙古多伦县草原站。 2渗透处理 配制5%、10%、15%、20%、25%、30% 和35%的PEG-6000（W/W）浸润种子，置于14℃培养箱中避光处理10小时后，用蒸馏水冲洗3-4次，置于滤纸上10分钟，自然风干。然后将羊草种子置于培养皿滤纸上，放入培养箱中20/30℃变温（8h高温，16h低温）黑暗条件下萌发，萌发过程中保持水分。每组200粒种子，3个重复。逐日观察统计发芽情况。10天后检测幼苗活力指数[幼苗活力指数=（胚根长+下胚轴长）×发芽率]。根据最高活力指数的PEG浓度对羊草种子进行8、12、16、20、24、36、48小时的浸润处理，筛选出24小时处理时间与30% PEG-6000渗透引发为最隹处理条件。再用30%PEG-6000处理羊草种子24小时后，进行萌发实验，分别取萌发4d、5d、6d、7d、8d、9d、10d的幼苗为材料，进行下一步的生理生化指标的测定。 1．3测定方法 经PEG预处理的各组羊草种子，用蒸馏水洗干净后，取重量一致的萌发种子（1.34g,500粒），在25ml重蒸水中萌发，分别在4、5、6、7、8、9、10天时测定种子外渗电导率，3次重复。外渗电导率的测定参照陈光仪的方法[7]。呼吸速率的测定参照碱吸收法，25℃时测定萌发种子呼吸释放的CO2含量[8]。超氧阴离子的测定参照王爱国等的羟胺法[9] 。过氧化物酶（POD）活性的测定按波钦诺克的方法[10]。过氧化物歧化酶（SOD）活性的测定，采用氮蓝四唑（NBT）光化还原抑制法[11]。丙二醛（MDA）含量的测定，按Heath等的硫代巴比妥酸（TAB）比色法[12]。 2 结果与分析 2．1 PEG处理对羊草种子活力的影响 用不同浓度PEG、不同时间处理的羊草种子萌发率及幼苗活力指数均高于对照，其中以30%PEG处理24h的羊草种子差异最为显著（表1、表2），发芽率可提高4倍左右，而活力指数提高了近10倍。 表1：不同PEG浓度处理对羊草种子萌发率及幼