高盐极端环境土壤宏基因组文库地构建与一个新地淀粉酶基因地克隆.pdf

广西大学硕士论文 高盐极端环境士壤宏基因组文库的构建及一个新的淀粉酶基因的克隆 1．1．2嗜盐微生物的研究及意义 由于嗜盐微生物长期生长在特殊环境下，具有特殊的细胞结构、生理机能和遗传基 因，其生物活性物质也具有独特的性质，是一类重要的极端微生物资源，同时也是研究 生物进化和生物多样性的重要材料，因此开展嗜盐微生物的研究对于推动生命科学的深 入开展和加快我国微生物产业的发展及微生物资源的开发利用具有重要意义，同时也可 丰富生物多样性研究的内容，并为生命演化和系统发育研究提供有价值的资料。 嗜盐菌有许多重要的生理特征，这些特征在实际应用上有重要用途【3I101。嗜盐古菌 的紫膜(purple 耐受范围，是未来制造生物计算机芯片的理想材料。同时这种蛋白构型的改变能产生可 供检测的电信号，为进一步的光控技术带来了希望【1”。从不同地质年代的古盐矿层中分 离到的保存完好的嗜盐古菌可用于考察物种的演变历史，因此古盐矿层中的嗜盐古菌是 研究生物进化的活化石。某些嗜盐菌能产生类胡萝h素、胡萝h素、Y一亚油酸等成分， 不仅是人体内vA的前体和食品加工的天然色素，还可防治癌症、心血管病及老年性痴 呆等疾病㈣。嗜盐菌中的酶将是工业上耐盐酶的重要来源【13,14]。有的嗜盐菌在一定条件 51。 下能大量积累Y一谷氨酸(PGA)和聚羟基丁酸(PHB)，可用于可降解生物材料的开发【l 如果在发酵工业上能利用这些嗜盐菌合成抗生素、有机酸，生产酒精、工业酶制剂和其 他一些产品，可有效防止杂菌污染，因为嗜盐菌可在高浓度NaCl发酵液中生长和代谢， 而高浓度NaCt发酵液可抑制大多数微生物的生长。此外，嗜盐菌在海水淡化、高盐污 水的处理以及盐碱地改造利用方面也将发挥重要作用。 1．1_3嗜盐微生物的酶 嗜盐微生物细胞内具有相当高浓度的不同种类的酶(见表1．1)，因而，嗜盐微生物 中许多或者说大部分的酶都需要盐来维持其活性和稳定性，按照盐浓度来讲，酶通常分 mol／L浓度的盐浓 为三类情况：(1)以较高盐浓度(1mol／L)来维持酶活性，在2—4 度中有最大的酶活性，如天冬氨酸转甲酰酶，许多氨基酸的活化酶及与细胞膜相连接的 浓度高于1．5mol／L时，其活性被抑制。(3)在缺盐的条件下呈现酶活性，在高浓度盐 环境下被强烈抑制酶活性的，如脂肪合成酶，依赖DNA的RNA聚合酶。 2 广西大学硕士论文 高盐极端环境土壤宏基因组文库的构建及一个新的淀粉酶基因的克隆 表1．I嗜盐微生物产生的酶 Table I．1Enzyme microorganism ofHalophlic 由表1．1可以看出传统的纯培养技术在可培养生物数量上受到了很大程度上的限 制，影响到后期的特性酶筛选，为了能筛选到更多性质优异的新酶，我们有必要从未培 养微生物技术的角度对高盐这一极端环境的微生物资源进行深入研究。 1．2未培养微生物 生存在自然界不同环境样品中的微生物群落，他们常具有非常复杂和显著差异的分 【161等现代分子技术可以推测。现今大约有一百万到一千万种微生物存在于自然界，而为 人所知的微生物还不到自然界中微生物总数的1％。最新研究表明19土壤竟包括有4000 多种不同的微生物㈣。部分微生物类群研究的一些参考数据见图1。 由于目前科研设备及培养条件的限制，绝大多数微生物尚无法在实验室条件下培养， 这意味着无法用目前的分子生物学的实验手段对这些未培养的微生物进行研究【l”，数量 如此众多的未培养微生物含有的巨大的基因资源也就无法被人们所利用，因此，未培养 广西大学硕士论文 高盐极端环境土壤宏基因组文库的构建及一个新的淀粉酶基因的克隆 微生物可能是地球上最大的尚未开发的自然资源。 对未培养微生物的研究，不仅可以使人们真正的了解到其不可被培养的原因，更重 要的是，这一巨大生物资源的开发对社会的发展具有重大的推动作用。因