人教版高中生物选修一5-3血红蛋白的提取和分离同步课件.pptVIP

特别提醒　SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的负电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质分子相对迁移率的大小完全取决于相对分子质量的高低，因此可从已知相对分子质量的标准蛋白质的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出供试品的相对分子质量。 【巩固2】 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 (　　)。 A．防止血红蛋白被氧化 B．血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 解析　利用磷酸缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于分离观察(红色)和研究(活性)。 答案　D 【例1】 下图中，可表示为相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的移动过程的是 (　　)。 血红蛋白提取和分离的基本原理 思维导图： 深度剖析　本题考查凝胶色谱法原理。根据分子筛效应可知，相对分子质量较大的蛋白质分子通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量最小的分子最后流出，故选B。 答案　B 特别提醒　血红蛋白的分离方法及相关原理比较： 方法 原理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 根据各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同进行分离 【例2】 下图是用除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置，下列有关叙述不正确的是 (　　)。 血红蛋白提取和分离的实验操作 A．首先用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较小的杂质 B．图乙装置的试管中收集到的液体中最先出现的是相对分子质量较小的蛋白质 C．用图乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每管收集5 mL，连续收集 D．图丙装置中电泳法分离提纯血红蛋白的原理是血红蛋白带有一定量的电荷，在电场的作用下向一极移动 思维导图： 深度剖析　用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较小的杂质。图乙装置表示通过凝胶色谱法分离蛋白质的过程。蛋白质的相对分子质量较大，被排阻在凝胶颗粒的外面，在颗粒之间迅速通过。 答案　B [归纳整合]蛋白质的提取和分离 步骤 操作 样品处理 通过红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液等操作收集到血红蛋白溶液 粗分离 通过透析法去除血红蛋白溶液中的相对分子质量较小的杂质 纯化 通过凝胶色谱法分离相对分子质量不同的蛋白质 纯度鉴定 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳判断纯化的蛋白质是否达到要求 单击此处进入 随堂达标检测 旁栏思考题 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 答案　凝胶实际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量较大的蛋白质不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。 因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，从而使各种相对分子质量不同的分子得以分离。如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，影响分离的效果。 练习 1．解析　本题考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理。该方法的原理的核心是利用了不同体积(大小)的蛋白质在凝胶中的迁移速度不同以达到分离的目的。 答案　凝胶色谱法也称为分配色谱法，它是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，各分子在色谱柱内进行两种不同的运动，即垂直向下的运动和无规则的扩散运动。 相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，这种现象又叫分子筛现象。此外，凝胶本身具有三维网状结构，相对分子质量大的分子通过这种网状结构上的空隙时阻力大，而相对分子质量小的分子通过时阻力小，因此不同相对分子质量的蛋白质分子可以获得分离。 2．答案　在一定范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或