高中生物DNA和蛋白质技术5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段课件新人教版本.ppt

PCR 循环第三步 ：引物延伸 靶序列 靶序列 第1个 PCR 循环完成后 ：得到两个拷贝的靶序列 95℃变性 （1）PCR循环——变性 （1）PCR循环——变性 95℃变性 95℃变性 （1）PCR循环——变性 55℃复性 （2）PCR循环—复性 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 循环次数 DNA数量 1 2 3 20 30 3、30次循环后靶序列扩增的数量 循环次数 DNA数量 1 2 2 4 3 8 20 1,048,576 30 1,073,741,824 3、30次循环后靶序列扩增的数量 4、循环特点： 4、循环特点： ①上一次循环的产物为下一循环的模板 ②结果单链中有最初母链的只两条（无引物存在） ③其它子代DNA分子都为双引物分子 ④处于两引物之间的DNA序列呈指数增长1×2N 5、原料 6、基本条件 4、模板 DNA母链 5、原料 脱氧核苷酸 6、基本条件 4、模板 DNA母链 5、原料 脱氧核苷酸 6、基本条件 酶、ATP、原料、模板 4、模板 DNA母链 7、复制过程 7、复制过程 ?① DNA的解旋 7、复制过程 ?① DNA的解旋 　　亲代DNA分子利用细胞提供的能量在解旋酶的作用下氢键断裂，部分双螺旋链解旋为两条平行的双链 DNA聚合酶的特性 　　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。 ?② RNA引物的合成 ?② RNA引物的合成 　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?② RNA引物的合成 ?③ DNA的生成 　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?② RNA引物的合成 　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?③ DNA的生成 　　以DNA单链为模板，在DNA聚合酶的作用下，在RNA引物的末端由5′端→3′端合成DNA。 DNA合成的方向 子链由5′ 端向 3′端延伸 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 控制温度 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 托马斯.布鲁克 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) ①DNA模板； ②分别与两条模板链相结合的两种引物； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶； ⑤ 控制温度，但不需解旋酶。 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) （三） PCR的反应过程 1、PCR的反应步骤 1、PCR的反应步骤 　　PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 （三） PCR的反应过程 ①变性（模板DNA解旋） 　　模板DNA加热至900C以上时，模板DNA双链解离，成为单链。 2、循环过程 靶序列 靶序列 PCR 循环第一步 ：加热变性 ②复性（退火） 　　温度下降到50℃左右，两种引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 PCR 循环第二步 ：引物与靶序列退火 ③延伸 　　温度上升到72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链 一、基础知识 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、