拟南芥CYCD3;1基因植物表达载体的构建及在烟草中的遗传.PDFVIP

安徽农业大学学报, 2016, 43(6): 996-1003 Journal of Anhui Agricultural University [DOI] 10.13610/ki.1672-352x008 网络出版时间：2016/12/5 9:39:00 [URL] /kcms/detail/34.1162.S0939.016.html 拟南芥 CYCD3;1 基因植物表达载体的构建 及在烟草中的遗传转化分析 1 1 1 1 2* 1 代丽娟 ，郑唐春 ，刘彩霞 ，刘 轶 ，由香玲 ，曲冠证 (1. 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室，哈尔滨 150040 ；2. 东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040) 摘 要：为了分析植物 D 型细胞周期蛋白在细胞周期中的作用，采用 PCR 方法从拟南芥花序中克隆出 AtCYCD3;1 基因的全长 cDNA 序列。该基因的开放读码框为 1131 bp，预测编码 376 个氨基酸，蛋白质的分子量为 42701.6 Da ，蛋白质的等电点为4.89 。构建植物表达载体pROKII-AtCYCD3;1 ，并利用农杆菌介导的叶盘法将外源 基因导入野生型烟草中。通过 PCR 及 qRT-PCR 检测显示，AtCYCD3;1 成功插入烟草基因组并在转录水平表达。表 型观察显示转基因株系与野生型株系相比主要表现为花冠宽度变大，花瓣和萼片长度变长，果实变大，茎干弯曲， 叶片卷曲，根尖细胞变小。综上，拟南芥AtCYCD3;1 基因的过量表达影响了植物的生长发育。 关键词：AtCYCD3;1 ；周期蛋白；遗传转化；烟草 中图分类号：Q943 文献标识码：A 文章编号：1672352X (2016)06099608 Construction of plant expression vector and genetic transformation analysis of Arabidopsis thaliana CYCD3;1 gene in Nicotiana tabacum 1 1 1 1 2 1 DAI Lijuan , ZHENG Tangchun , LIU Caixia , LIU Yi , YOU Xiangling , QU Guanzheng (1. State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding, Northeast Forestry University, Harbin 150040; 2. College of Life Science, Northeast Forest University, Harbin, 150040) Abstract: In order to analyze the role of plant D-type cyclins in plant development, a cDNA sequence of a ho- mologous gene of CYCD3;1 was cloned from Arabidopsis inflorescences (AtCYCD3;1) using PCR. The open read- ing frame (ORF) of AtCYCD3;1 was 1131 bp in length, which encoded a protein containing 376 amino acids, while the estimated molecular weight and isoele