保守的第52位色氨酸突变引起的胰高血糖素样肽1受体N端片段活性.PDFVIP

高蔚丰 等/保守的第52 位色氨酸突变引起的胰高血糖素样肽 1 受体N 端片段活性丧失 87 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology January 25, 2013, 29(1): 87−94 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 保守的第52 位色氨酸突变引起的胰高血糖素样肽 1 受体N 端片段活性丧失 高蔚丰，王娟 宁夏大学生命科学学院，宁夏 银川 750021 高蔚丰, 王娟. 保守的第52 位色氨酸突变引起的胰高血糖素样肽1 受体N 端片段活性丧失. 生物工程学报, 2013, 29(1): 87−94. Gao WF, Wang J. Conserved W52 led to reduced binding of glucogan-like peptide 1 receptor. Chin J Biotech, 2013, 29(1): 87−94. 摘 要: 通过易错PCR 方法建立了一个鼠肺不同长度的nGLP-1R (从第 21 个氨基酸开始到第 145 个氨基酸) 的噬菌体随机突变展示肽库，通过噬菌体表面展示技术检测胰高血糖素样肽1 受体N 端片段 (nGLP-1R) 在缺 失一段或两段基因后是否还具有结合Exendin-4 的活性。经ELISA 分析发现了一株无结合活性的突变株，命名 为EP16 。经测序比对，发现EP16 缺失了前20 个和后 10 个氨基酸，且第52 位色氨酸突变为精氨酸。为确定 EP16 与Exendin-4 无结合活性的原因，重新构建了无前20 个和后 10 个氨基酸的EP16 野生型及第52 位色氨 酸变为精氨酸的全长nGLP-1RW52R 与EP16 进行对比分析。结果表明，EP16 的活性丧失是由保守的第52 位色 氨酸突变为精氨酸引起的，缺失的前20 个和后 10 个氨基酸没有影响其生物学活性。关键位点单个氨基酸残基 的突变可以改变胰高血糖素样肽1 受体N 端片段整个蛋白质的生物学活性。 关键词: 胰高血糖素样肽 1 受体，Exendin-4 ，易错PCR Conserved W52 led to reduced binding of glucogan-like peptide 1 receptor Weifeng Gao, and Juan Wang School of Life Science, Ningxia University, Yinchuan 750021, Ningxia, China Abstract: Through phage display, we tried to find out whether the N-terminal fragment of glucogan-like peptide 1 receptor (nGLP-1R) still had binding activity to Exendin-4 after missing one or two gene segments. By error-prone PCR, Received: August 15, 2012; Accepted: December 5, 2012 Supported by: Science Research Program of Ningxia Institution of Higher Education (2010). Corresponding author: Weifeng Gao. Tel: +86-951-3976261; E-mail: stephanie.wf@163.com 宁夏高等学校科学研究项目 (2010 年度) 资助。 88 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech January 25, 2013