两种人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的比较研究.PDFVIP

第 32 卷第 11 期Vol.32, No.11 生 殖 与 避 孕 http://www.RandC.cn 2012 年 11 月Nov. 2012 Reproduction Contraception reproduction_journal@ 两种人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的比较研究 江 欢1 谢宝国1 罗 琛2 李 红2 朱伟杰1 (1. 暨南大学生命科学技术学院, 生殖免疫研究所, 广州, 510632) (2. 南方医科大学南方医院妇产科生殖医学中心, 广州, 510515) 【摘要】目的: 比较2 种人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的效果。方法: 收集体外受精- 胚胎移植 (IVF-ET)穿刺取卵后的卵泡液, 分别用2种方法分离提取颗粒细胞。A 法用红细胞裂解液去除混杂 红细胞、酶消化卵泡液中黏液团、Percoll 分离液与细胞悬液等体积叠加后离心; B 法省略红细胞 裂解步骤、舍弃黏液团、增加Percoll 分离液用量。比较2 种方法获取的颗粒细胞数量、活性、纯 度以及实验耗时。结果: 2 种方法获取的颗粒细胞存活率均90%, 差异无统计学意义(P0.05) 。A 法获取的颗粒细胞数量多于B 法(P0.05), 但混杂较多细胞碎片, 体外培养细胞生长状态欠佳; B 法 获取的颗粒细胞纯度高, 体外培养生长状态良好, 且实验耗时较A 法短(P0.05) 。结论: 2 种方法对 颗粒细胞存活率无明显影响。B 法更为省时高效, 有助于建立稳定的颗粒细胞体外培养体系。 关键词: 卵巢颗粒细胞; 细胞分离; 体外培养 中图分类号: R329 文献标识码: A 文章编号: 0253-357X(2012)11-0728-05 颗粒细胞是卵泡内最大的细胞群, 与卵泡膜细 1 材料与方法 胞协同调控女性甾体激素的合成[1], 也直接参与了卵 1.1 标本 母细胞的生长、发育和成熟等生殖事件[2,3] 。因此, 选取因输卵管或男方因素不孕在南方医院生殖 颗粒细胞可作为研究女性生殖细胞生物学行为及其 中心行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的妇女, 年 功能调控的良好细胞模型[4,5] 。当今人工辅助生殖技 龄 25~30 岁。所有患者均采用黄体期长方案降调 术得到广泛应用, 操作过程废弃的卵泡液中含有大量 节; 取卵日收集穿刺取卵和捡卵后废弃的卵泡液。 的颗粒细胞, 收集这类颗粒细胞行体外培养实验, 可 本研究获伦理委员会批准, 所有标本提供者均知情 为了解颗粒细胞的某些细胞活动提供参考资料。文 同意。 献报道的颗粒细胞体外分离培养方法已较成熟, 但 1.2 主要试剂 分离提纯后颗粒细胞的存活率仅在57.6%~75.0%[6,7] 。 Percoll 细胞分离液和台盼蓝均购自美国Sigma 本实验从细胞分离、纯化的多个环节用两种不同的 公司, Percoll 分离液原液与 10 ×PBS 以9 ∶1 体积 方法进行比较, 旨在建立一个更高效省时的颗粒细胞 比混合配制成体积分数 1 0 0 % P e r c o l l 分离液, 分离提纯方案。