核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析.pptVIP

主要核酸类药物及用途 主要核酸类药物及用途 DNA酶抑制剂： 金属离子螯合剂：DNA酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活，因此使用金属二价离子螯合剂，可抑制DNA酶活性。如：EDTA 阴离子表面活性剂：如SDS。该试剂除对核酸酶有抑制作用外，还能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物，该复合物在高盐溶液中沉淀。 RNA酶抑制剂： 皂土：带负电荷，能吸附RNase，使其失活。 DEPC(焦碳酸二乙酯 )：通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。 EDTA：破坏细胞膜，螯合Mg2+、Ca2+，使DNase失活； SDS：可破坏细胞膜、抑制核酸酶，还可使核酸从蛋白质上游离下来； 蛋白酶K：非特异性蛋白酶，可将蛋白质消化成氨基酸； 65℃：高温下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸； 冰浴：降低温度使蛋白质及多糖杂质沉淀； 水饱和苯酚：由于蛋白与DNA连结键已断裂，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，DNA溶于水相。苯酚使蛋白质变性，并抑制了DNase的降解作用。 氯仿：氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，减少残留在水相中的酚，还能去除植物色素和蔗糖。 异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变