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配制100ml 、100umol/L 的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧化氢原液?请写出计算过程。
答:首先计算其摩尔浓度:
若30%为其质量百分数
双氧水30%浓度的试剂(上海国药集团出品),室温时实测密度为:1,122 g/L,所以,1L 30%含量的双氧水中过氧化氢含量为:1122g/L ×1L×30%=337g
又H2O2的分子量为34.0146,那么1L 30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为:337/34.0146=9.908 mol/L.
100ml×10-3×100 umol/L×10-6=9.908 mol/L×V
V=10-6L=1 ul
若30%为体积分数
100% H2O2密度是1,440 g/L, 30 ml H2O2的质量为1440 g/L ×30 ml×10-3=43.2g,30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为:43.2/34.0146/0.1=12.7 mol/L.
100ml×10-3×100 umol/L×10-6=12.7 mol/L×V
V=7.9×10-7L=0.79 ul
植物组织中过氧化氢含量测定
植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
【原理】
H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】
研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。
【试剂】
100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。
【方法】
1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表加入试剂。
测定H2O2浓度标准曲线配置表
试剂(ml)
离 心 管 号
1
2
3
4
5
6
7
100μmol/L H2O2
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
4℃下预冷丙酮
1.0
0.9
0.8
0.6
0.4
0.2
0
5%硫酸钛
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
浓氨水
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
?
3000r/min 离心10min,弃去上清夜,留沉淀
2mol 硫酸
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。
2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2g,按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后5000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算:
植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)=
式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol);
Vt—样品提取液总体积(ml);
V1—测定时用样品提取液体积(ml);
FW—植物组织鲜重(g)。
4、实验结果:
1
2
3
4
5
6
7
H2O2浓度
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
吸光度A
0
0.049
0.126
0.315
0.425
0.625
0.778
得出标准曲线如下图:
测定所得样品的吸光度为0.188,带入得0.2459,考虑到称取鲜重2.116g 代入公式含量为H2O2 =0.116μmol/g Fw。
注意事项
1、离心机离心时应该先配平。
2、加试剂的顺序一定不可以错。
3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。
4、注意所用H2O2 的浓度。
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