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志贺氏菌检验 革兰氏阴性短杆菌 增菌 固体样品：25g（电子天平） 液体样品：25mL（25mL吸量管） + 225mLGN增菌液（量筒），混匀。 培养（于36℃±1℃培养6~8h） 注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。 分离 从阳性增菌液中用接种环取 平板划线示意图 初步生化试验 取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板（在放阳性物品处） 斜面划线方法 葡萄糖半固体培养结果：沿穿刺线生长，无动力 革兰氏染色结果： G-（红色，短杆菌，无荚膜，无芽孢） 血清凝集试验 ②从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面上用接种环取1环 革兰氏染色步骤： 涂片—— 火焰固定——结晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇脱色—— 水洗—— 吸干—— 番红或沙磺复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。 碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20 ~ 30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。 番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 ~ 2 min。 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 干燥：于室温下自然干燥。 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观察。 结果: 革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。 * * * * 增菌 增菌 分离 初步生化试验 血清凝集试验 革兰氏染色 稀释瓶或具塞广口瓶 1环 HE琼脂平板，划线 1环 麦康凯琼脂平板，划线 36℃±1 ℃ 18~24h 培养 麦康凯琼脂平板 HE琼脂平板 开始处 开始处 HE琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落 麦康凯琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落 或 典型菌落 （同一菌落） 三糖铁斜面：先划线，后穿刺 葡萄糖半固体：穿刺 于36℃±1℃培养18~24h 于36℃±1℃培养18~24h 斜面穿刺方法 三糖铁斜面培养结果：上层红色，下层黄色（产酸） 对照试验 红色：产碱 黄色：产酸 黑色：产硫化氢 对照试验 葡萄糖半固体 从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面取1环，染色。 在无菌室中固定，到微生物实训室染色 玻片 用记号笔在玻片中间画条线 ① 滴1~2滴灭菌生理盐水 ①滴1~2滴志贺氏菌多价血清 结果：志贺氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固 * *