中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增,克隆及分析.docVIP

PAGE 2118 中 国 农 业 科 学 40卷 9期 宋慧群等：中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析 PAGE 2117 中国农业科学 2007,40(9):2114-2118 Scientia Agricultura Sinica 收稿日期：2006-07-05；接受日期：2007- 基金项目：国家“973”计划前期研究专项资助课题（2007CB116301）、广东省自然科学基金；广东省科技计划（2004 作者简介：宋慧群（1963-），女，四川青神人，研究方向为寄生虫的分子遗传学及分子检测。通讯作者朱兴全（1963-）男，四川什邡人，教授，博士，研究方向为分子寄生虫学。TelE-mail：xingquanzh@scau.edu.cn 中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析 宋慧群1，张德林2，廖申权1，翁亚彪1，林瑞庆1，朱兴全1 （1华南农业大学兽医学院，广州 510642；2中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州 730046） 摘要：【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529 bp重复序列的变异进行研究，从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后，用PCR方法对10个虫株的529 bp重复序列进行扩增；扩增产物经纯化后克隆于pGEM-T Easy质粒载体，再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆，然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529 bp重复序列都不完全相同，它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主要位于第32～55位碱基之间,这些碱基变异与虫株的宿主来源、地域来源及毒力之间没有相关性。【结论】529 bp重复序列可作为遗传标记，用于弓形虫与其它寄生虫的种间鉴定，但不适合用于研究弓形虫的种内遗传变异。 关键词：弓形虫；PCR；529 bp重复序列；序列分析；遗传变异 Amplification, Cloning and Sequence Analysis of a Repetitive 529bp DNA Fragment from Toxoplasma gondii Strains from China SONG Hui-qun1, ZHANG De-lin2, LIAO Shen-quan1, WENG Ya-biao1, LIN Rui-qing1, ZHU Xing-quan1 (1College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642；2Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046) Abstract: 【Objective】The objective of the present study was to examine sequence variation in the repetitive 529 bp DNA fragment among 9 T. gondii strains from different hosts and geographical locations in China, and to compare the sequences with that of the RH reference strain. 【Method】 The 529 bp fragment was amplified by PCR from genomic DNA of the 10 T. gondii strains, and the amplicons were purified, cloned into pGEM-T Easy vector and the recombinant plasmids were identified by colony PCR and digestion with endonuclease EcoR I, and then sequenced. 【Result】 Sequen