三尿蛋白的定量测定.PPT

实验三 尿蛋白的定量测定 （双缩脲法） 学习尿蛋白的测定方法 加深对尿蛋白的认识及其测试的意义 掌握尿蛋白指标在运动训练中的应用 蛋白质分子中含有许多肽键，在碱性溶液中能与Cu2+作用产生紫红色络合物，与双缩脲分子结构相似，故称双缩脲反应。 其紫红色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可用比色法测定其含量。 15N硫酸溶液。 1.5%钨酸钠溶液 双缩脲试剂 用一次性尿杯留取尿液（如测24h尿蛋白，则需将24h尿液混匀后留样）。用pH试纸测试尿液酸碱度，若pH超过8.0，用少量30%乙酸调节至中性偏酸，用尿蛋白试纸做定性测试，若尿蛋白在 “+++”至“++++”之间，则需将尿液稀释5倍。 取1支大离心管，标号，按表1操： 另取6支大试管，分别作为空白管及标准管1~5，上述含沉淀物的离心管为测定管，标号后按表2操作： 计算公式： （1）标准管法 尿蛋白（mg%）= OD测/OD标×Cs ×尿液稀释倍数 （2）绘制标准曲线，查出测定管结果。 尿液较浑浊时，应先加热清除无机盐结晶。 结果为零可能有如下因素：离心之后不小心将蛋白质沉淀倒掉；操作过程中没有及时摇匀，蛋白质沉淀没有溶解；加入生理盐水等过多，将蛋白质稀释；加钨酸钠溶液后静置时间不够，蛋白质没有充分沉淀下来；加双缩脲试剂后放置时间太短，反应没有完全进行。 结果过高，或出现混浊，可能是尿液中磷酸盐、草酸盐等