丁苯酞通过pgc-等1αnrf2通路发挥对多发性硬化小鼠神经系统线粒体的保护作用.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责 任。 研究生签名：避 导师签章：翻．二级学院领喜盖章： ?7 J j ：_ ．1。l蔓年弓月；o＼艮?jo≯ ＼0 ．≥’’ 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别 加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写|的研究成果，指导教 师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名： 导师擀书噜 pp I 5平5月；os年；月；o nIzl 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 5 英文缩写 9 研究论文丁苯酞通过PGC．1 a／Nrf2通路发挥对多发性硬化小鼠神 经系统线粒体的保护作用 前言日IJ舌 ·10‘lU 材料与方法 11 结果 ·19 附图 22 附表 28 讨论 ·30 结论 ·33 参考文献 33 综述多发性硬化对神经系统线粒体的损伤及保护机制 一36 致谢 45 个人简历 46 万方数据 中文摘要丁苯酞通过PGC．1a／Nrf2通路发挥对多发性硬化小鼠神经 中文摘要 丁苯酞通过PGC．1a／Nrf2通路发挥对多发性硬化小鼠神经 系统线粒体的保护作用 摘 要 目的：多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种自身免疫性中枢神 经系统炎性脱髓鞘疾病，其基本病理改变为炎性细胞的浸润、髓鞘的脱失、 轴索损伤。最新研究表明：l、多发性硬化早期致残和疾病进展与神经轴 索损害程度相关，是中青年致残的主要病因之一。2、多发性硬化病程中 不仅存在髓鞘和轴索损伤，还存在明显的线粒体形态及功能的损伤。发病 早期即可出现氧自由基及其毒性产物大量产生，在造成神经纤维脱髓鞘及 轴索变性的同时，可直接损伤线粒体，导致病变周围神经的能量代谢障碍， 从而加重脱髓鞘及轴索损伤；在疾病亚急性期及恢复期，炎性反应程度减 弱，此时线粒体处于瘫痪状态，氧化呼吸链断裂，供能障碍，最终导致轴 索及神经细胞不可逆性损伤。丁苯酞(d1．3．n．butylphthalide，NBP)活性 成分为d1．3．正丁基苯酞，为脂溶性药物，可以直接通过血．脑屏障发挥作 用。大量的临床及实验室研究已经证明其对缺血性脑血管病具有线粒体保 护作用，本研究旨在了解实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠在疾病 发生发展过程中线粒体功能变化，并进一步探讨丁苯酞对EAE小鼠线粒 体的保护作用及机制，为临床治疗多发性硬化提供新的方法及实验依据。 方法：选取60只8．10周龄C57BL／6小鼠，使用MOG35．55作为抗 原免疫建立EAE模型。以EAE评分0．5分及以上为模型成功，选取发病 小鼠54只，随机分为低剂量NBP组、高剂量NBP组、地塞米松组、EAE 组，并设正常对照组。低剂量NBP组烈BP．L)12只、高剂量NBP组 (NBP．H)12只、地塞米松组(DXM)12只、EAE组9只。随机选取6只正 常小鼠为正常对照组。低剂量NBP组和高剂量NBP组小鼠分别腹腔注射 丁苯酞80mg／kg／d，120 mg／kg／d。地塞米松组(D瑚)小鼠给予地塞米松磷酸 钠注射液0．07mg／kg／d腹腔注射；正常对照组及EAE组：小鼠每日腹腔 注射等体积DMSO，共14天。分别于发病后第O天、第7天及第14天 三个时间点观察C57BL／6小鼠自免疫后的精神状态、活动情况、发病情 况及神经功能评分。随后处死小鼠取脊髓腰膨大组织。采用HE染色观察 万方数据 中文摘要小鼠脊髓炎症细胞浸润情况，免疫组织化学染色法及实时定量PCR法测 中文摘要 小鼠脊髓炎症细胞浸润情况，免疫组织化学染色法及实时定量PCR法测 定小鼠脊髓腰膨大PGC．1a、Nrf2及Na+／K+ATPase mRNA的表达情况。 结果： 1动物发病及临床评分情况观察：小鼠大多数在免疫后第10天左右开始 发病，在发病后第7至15天到达临床高峰。丁苯酞低剂量、丁苯酞高剂 量及地塞米松组小鼠，临床评分最高平均出现在发病后7天，而EAE组 小鼠临床评分最高出现在14天左右(Table．1)，该结果提示干预用药后的 小鼠临床症状较未用药小鼠轻，干预后小鼠自发病第七天开始好转，评分 下降，而未用药小鼠则呈逐渐加重趋势。 2实验室指标观察 2．1 HE染色