二苯醚及低溴代二苯醚好氧降解菌筛选及降解七机制研究-微生物学专业毕业论文.docx

致谢本论文从立题到目前的完成阶段，离不开我的导师赵宇华教授的大力支持、 致谢 本论文从立题到目前的完成阶段，离不开我的导师赵宇华教授的大力支持、 严格教诲和悉心指导。本文的立题是有一定风险的，且难以在短期取得较好的结 果。若离开了赵老师的信任、支持和鼓励，本文从一开始就不会存在，更别提后 面作出更深入的工作。应该说，本文的思路是有一些问题的．但赵老师的信任与 宽容使我能够专注于既定路线的实现，这是我能形成较为独立的科研思考习惯和 科研价值观的关键。由于赵老师的信任，这些年我有幸参与了一些项目的申请及 执行过程，积累了不少对E1后研究工作很有帮助的经验。除了对研究工作本身的 指导和支持，赵老师在E1常生活上对我的关心和帮助，也在很大程度上缓解了我 家庭和工作的压力。在论文成文之际，我借这个机会向赵老师表达自己由衷的谢 意。 我还要感谢贾小明老师和马晓航老师给与我的帮助和影响。二位老师严谨的 治学和工作态度，使我在初入实验室之时便深深受到触动。直至今日。我仍以二 位老师的作风作为自己的处事标准。 从我进入实验室直到毕业，经历了实验室人员的多次变动，但实验室始终给 我提供了一个轻松、简单的工作环境。对于每一位曾经共同在实验室奋斗的同学 和朋友，我想说一声谢谢。感谢都林娜师姐在我进入研究工作的最初阶段给与我 的指导和帮助，没有师姐就没有今天的我。感谢冯琢、白娜玲、张美楠三位师妹， 在不同阶段参与了我的研究工作，是我在研究中的重要伙伴。同时，对于师姐和 师姝，我从未拿出配的上你们信任的研究实力，我很惭愧，在此一并作出道歉! 感谢丁海涛师兄在实验室建设方面作出的巨大贡献!感谢胡华、杨玉义、金丹凤、 林辉、沈琦、冯琢、孙朋飞、王群、惠彩、张美楠等先后承担实验室管理工作的 同学们，实验室的正常运行离不开你们的工作。尤其是胡华、金丹风、冯琢、王 群等负责过财务工作的同学，其辛苦可想而知。共事过的同学还有很多，其中还 有很多给过我帮助的同学，在此难以一一致谢，但帮助过我的人是绝不会被我忘 记的。 感谢我的夫人王兵女士这几年对我工作的理解和默默支持。作为博士研究生 的生活是清苦的，容易招致亲友的一些误解。但夫人对我的支持足以让我不受所 有来自生活的烦扰影响．让我能够坚持自己想做的事情。 女儿簪和还不懂事，不能理解和参与我毕业的过程。但我很希望你能知道， 爸爸很开心能有你和妈妈，看着你就像看到了我自己最美好的年纪。 最后，感谢我的父母直至今El对于我的一切支持，你们对我的帮助和你们的 付出已经远远超出你们所应做的范围，远非我能够回报的。希望此番毕业能够成 为一个转折点，让我也为家里出一些力。 万方数据 目录摘要 目录 摘要 i Abstract ． ． ． ．． ． ． ．． ．．． ．． ．．．．．． ． ． ． ．． ． ． ． ． ．．．． ． ． ． ． ．iii 第一章文献综述 ．1 1．1多溴二苯醚的毒性 l 1．1．1神经发育性毒性 ．2 1．1．2内分泌干扰作用 ．3 1．1．3潜在的致癌性 ．4 1．2多溴二苯醚的污染现状 4 1．3多溴二苯醚的理化处理方法 5 1．4多溴二苯醚的生物修复 7 1．4．1厌氧细菌脱溴 ．7 1．4．2真菌降解 ．9 1．4．3好氧细菌降解 10 1．5本课题立题依据 一1 1 第二章二苯醚降解细菌分离及特性研究 13 2．1前言 ．．13 2．2材料 一13 2．2．1样品来源 13 2．2．2主要试剂 13 2．2．3培养基和缓冲液 14 2．2．4主要仪器和设备 16 2．3方法 ．16 2．3．1菌株富集、分离 16 2．3．2菌株的形态及生理生化鉴定 1 7 2．3．3降解菌株16S rDNA扩增 17 2．4结果与讨论 ．．1 8 2．4．1二苯醚检测条件的探索优化 18 2．4．2二苯醚降解细菌富集筛选 22 万方数据 2．4．3 2．4．3 C basilensis WS对二苯醚及低溴代二苯醚的降解特性 23 2．4．4 c basilensis WS降解二苯醚及低溴代二苯醚产物分析 27 2．5本章小结 一32 第三章二苯醚降解菌株突变及降解基因的定位 33 3．1前言 ．33 3．2材料 一33 3．2．1主要菌株和培养基 33 3．3方法 34 3．3．1二苯醚降解率测定 34 3．3．2突变库构建及突变筛选 34 3．3．3染色体步移 35 3．3．4基因组草图构建 39 3．4结果与讨论 一39 3．4．1转座子突变库构建条件摸索优化 39 3．4．2突变株筛选及鉴定 40 3．4．3基因组草图绘制 4l 3．4．4突变位点鉴定 42 3．5本章小结 ．．46 第四章二苯醚降解基因功能及降解途径分析 47 4．1前言 47 4．2材料 ．47 4．3方法