钙离子激活的氯离子通道在慢性鼻窦炎中对与黏蛋白muc5ac表达的调控作用实验研究.docxVIP

复旦大学博士学位论文中文摘要 复旦大学博士学位论文 中文摘要 钙离子激活的氯离子通道在慢性鼻窦炎中对黏蛋白MIJC5AC表达的调控作用研究 慢性鼻窦炎是影响人类健康的常见疾病，长期大量流脓涕是困扰患者的一大主要 症状。传统的治疗方法如应用抗生素、血管收缩剂、穿刺冲洗等均不能有效改善其长 期流脓涕的症状。即使通过鼻内镜手术，改善了鼻窦的引流问题，术后流脓涕的问题 仍不能得到有效解决。 慢性鼻窦炎长期流脓涕与鼻窦黏膜中粘蛋白(mucin，MUC)的大量分泌有着密切 关系，使其具有“粘液高分泌性疾病”的特点。近年来研究发现，在人呼吸道上皮中 钙离子激活的氯离子通道(calcium—activatied chloride channel 1 CaCCl或HCLCAl) 参与促进上皮杯状细胞增生，增加MUCSAC的合成。在许多具有“粘液高分泌性疾病” 特点的下呼吸道疾病中，如慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)、哮喘、慢性支气管炎等，已发现CaCCl均有特异性的高表达，通过 应用CaCCl抑制剂尼弗灭酸(niflumic acid NFA)，可以有效抑制呼吸道上皮杯状细 胞再生颗粒的产生,IMUC5AC的分泌，对这类疾病具有潜在的治疗作用。因此我们设想 在慢性鼻窦炎的病理机制中，CaCCl可能同样发挥重要作用，通过对CaCCl的干预，观 察能否改善其“高黏液素”的病理环境，从而从新的角度探讨解决其长期流脓涕的问 题。因此，对CaCCl在慢性鼻窦炎中对黏蛋EtMUC5AC表达的调控作用的关系进行了实 验研究，全文由三部分组成： 第一部分 钙离子激活的氯离子通道与慢性鼻窦炎关系的研究 目的：观察CaCCl在慢性鼻窦炎和／伴有鼻息肉黏膜中的表达，探讨其在慢性鼻窦炎发 病机制中的作用。方法：取I型和11型慢性鼻窦炎患者筛窦黏膜各lOB4，另取lO{歹JJ正 常筛窦黏膜作为对照。应用Real—time PCR方法检测各组鼻窦黏膜中CaCCl mRNA表达， 应用免疫荧光方法观察CaCCl蛋白在各组鼻窦黏膜中的表达情况，比较CaCCl蛋白在各 组中平均阳性细胞面积比。结果：CaCClmRNA在I型和II型慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中的表 达明显高于对照组(PO．01)，而在两组慢性鼻窦炎组之问差异无统计学意义 (PO．05)。I型和II型慢性鼻窦炎鼻窦黏膜均见杯状细胞增生。CaCCl在两组鼻窦黏膜 中均主要表达于上皮杯状细胞，平均阳性细胞面积比在I型和II型慢性鼻窦炎鼻窦黏 膜中差异无统计学意义(PO．05)，而与对照组相比，差异均有统计学意义(PO．01)。 结论：在基因和蛋白水平上，CaCCl在慢性鼻窦炎和／伴有鼻息肉的鼻窦黏膜中均有明 显表达，其在慢性鼻窦炎的发病机制中具有重要作用，可能与上皮杯状细胞的增生及 粘液高分泌有关。 复旦大学博士学位论文关键词： 复旦大学博士学位论文 关键词： 钙离子激活的氯离子通道1； 鼻窦黏膜； 慢性鼻窦炎； 鼻息肉 第二部分黏蛋白5AC与慢性鼻窦炎关系的实验研究 目的：观察MUCSAC在慢性鼻窦炎和／伴有鼻息肉鼻窦黏膜中的表达，探讨其在慢性鼻窦 炎病理机制中的作用。方法：实验分组同第一部分，应用real--time PCR方法检测各 组鼻窦黏膜MUC5ACmRNA表达，免疫荧光方法观察MUC5AC蛋白在各组鼻窦黏膜中的表 达，比较MUC5AC蛋白在各组中平均阳性细胞面积比。结果：MUC5ACmRNA在I型和II型慢 性鼻窦炎鼻窦黏膜中的表达明显高于对照组(PO．01)，而在两组慢性鼻窦炎组之间差 异无统计学意义(P0．05)MUCSAC在两组鼻窦黏膜中均主要表达于上皮杯状细胞，平 均阳性细胞面积比在I型和II型慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中差异无统计学意义(PO．05)， 而与对照组相比，差异均有统计学意义(P(O．01)。结论：MUCSAC在慢性鼻窦炎和／ 伴有鼻息肉的鼻窦黏膜中表达明显均增高，MUCSAC在慢性鼻窦炎的发病过程中可能发 挥重要作用。 关键词： 黏蛋白5AC； 鼻窦粘膜； 慢性鼻窦炎； 鼻息肉 第三部分 CaCCl在鼻窦粘膜组织培养中对MUC5AC调控作用的实验研究 目的：通过对CaCCl不同方式的干预，观察体外培养的鼻窦粘膜组织中CaCCl及MUCSAC 蛋白表达的变化。方法：取鼻内镜手术中切除的筛窦黏膜组织5例，采用组织块培养 法培养24小时，每例组织分为5组，A组：培养液不加任何干预；B组：加入人重组 TNF—a 10ng／mL；C组：加入NFA(CaCCl抑制剂)10umol／L30分钟后，加入人重组TNF～a lOng／mL：D组：加入NFAlOOumol／L30分钟后加入人重组TNF—a 10ng／mL：E组：加入 NFA 500