巴戟天醇提物对D—半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响.docVIP

PAGE PAGE 1 巴戟天醇提物对D—半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响 　　[摘要]目的探讨巴戟天醇提物对D-半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响。方法50只健康雄性Wistar大鼠随机均分为空白对照组、模型对照组、维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组，每组各10只。利用D-半乳糖制作衰老大鼠模型，并用维生素E及两种不同剂量的巴戟天醇提物进行灌胃。给药结束后，检测大鼠的胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、白介素-2（IL-2）水平以及CD28阳性淋巴细胞数。结果与模型对照组比较，维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、IL-2水平以及CD28阳性淋巴细胞数明显升高，差异均有统计学意义（均P0.05）。结论巴戟天醇提物能够增强D-半乳糖致衰老大鼠的免疫功能，可能具有延缓衰老的作用。 　　[关键词]巴戟天醇提物；D-半乳糖；免疫功能；刺激指数；白介素-2；CD28 　　[中图分类号]R393[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2013）02（a）-0017-03 　　近年来，我国人口老龄化趋势明显呈上升趋势，随之而来的因衰老引起的社会和医学问题严重困扰着广大学者，因此，关于如何延缓衰老的问题成为了目前生命科学工作者所关注的热点。研究表明，衰老是机体随着年龄的增长而出现的多种器官、组织等发生的退行性改变，属于一种自然生理现象，衰老的形成受多种因素的影响，机体所表现出来的体征等也多种多样，例如行动迟缓、记忆力下降以及免疫功能降低等[1]。 　　巴戟天最早是作为一种壮阳中药应用于一些基础研究和临床的，后来研究发现其具有补肾壮阳、增强性欲、抗肿瘤、缓解抑郁症状以及抗衰老等多种作用，作为提取自巴戟天的巴戟天醇提物也具有类似的作用[2-3]。以往的研究证实，巴戟天醇提物通过抗氧化以及抗凋亡而发挥其抗衰老作用的[4]，而关于其对衰老大鼠免疫功能的影响尚未有报道。因此，作者旨在通过将巴戟天醇提物应用于D-半乳糖致衰老大鼠模型来探讨其对衰老大鼠免疫功能的影响。 　　1材料与方法 　　1.1试剂 　　巴戟天醇提物提取自巴戟天（一等品，广东省德庆县药材公司，河南省食品药品检验所鉴定）；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、刀豆素（canavalin，ConA）（批号201200123，美国Sigma公司）；大鼠白介素-2（IL-2），定量酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）试剂盒（批号美国RD公司）；PE-兔抗大鼠CD28单抗（批号：12-0280-81，美国eBioscience公司）；考马斯亮兰试剂盒（批号南京建成生物工程研究所）。 　　1.2仪器 　　CASTEAX2100型全自动酶联免疫分析仪（美国Beckman公司）；FACSCalibur流式细胞仪（美国BectonDicknson公司）。 　　1.3实验动物 　　健康雄性Wistar大鼠，4月龄，体重200～245g，平均（223±12）g，由河南省实验动物中心提供。 　　1.4分组及处理 　　50只大鼠随机均分为空白对照组、模型对照组、维生素E组、巴戟天高剂量组、巴戟天低剂量组，每组各10只，各组大鼠常规分笼饲养。模型对照组及巴戟天高、低剂量组大鼠均每天皮下注射质量分数5%D-半乳糖1mL/kg；空白对照组大鼠均每天皮下注射质量分数0.85%氯化钠溶液1mL/kg；维生素E组大鼠每天在给予D-半乳糖的同时，给予维生素E50mg/（kg?d）灌胃；巴戟天高、低剂量组大鼠在每天给予D-半乳糖的同时，分别给予巴戟天醇提物2.1、0.7g/（kg?d）灌胃。所有大鼠均连续给药8周，之后进行免疫功能相关指标的检测。 　　1.5大鼠脏器指数的检测 　　首先对每只大鼠进行称重，并记录，然后常规解剖，无菌条件下取出脾脏、胸腺进行称重，计算脏器指数，公式如下：脾脏指数或胸腺指数=（脾脏重量或胸腺重量/大鼠体重）×100%。 　　1.6淋巴细胞转化试验 　　末次给药后次日，将取出的部分脾脏制成脾细胞悬液，调节细胞浓度至1×107/mL，然后加入96孔培养板，每孔200μL，再加入20μg/mLConA（用于T淋巴细胞转化试验）或LPS（用于B淋巴细胞转化试验），并设对照孔以及ConA刺激孔或LPS刺激孔。置于37℃、5%CO2培养箱中孵育72h，并采用MTT法测定570nm处OD值，根据OD值计算T、B淋巴细胞刺激指数，计算公式如下：刺激指数（SI）=（刺激孔OD值/对照孔OD值）×100%。所有实验重复3次，每次设3个复孔。 　　1.7IL-2表达检测 　　末次给药后