第一章 分光光度相关分析.ppt

分光光度分析的基本原理 分光光度分析的样品前处理 分光光度分析的条件选择 分光光度计的基本构造和使用流程 分光光度分析法 分光光度计的维护与保养 数据处理—线性回归分析法简介;学习要求 1、掌握紫外-可见分光光度分析的特点、基本原理、测定条件的选择、测定实验技术、定性和定量分析方法及有关术语。 2、掌握紫外-可见分光光度计的结构，使用、维护和保养方法。; 基于物质光学性质而建立起来的分析方法称之为光学分析法，分为:光谱分析法和非光谱分析法（如比色法、旋光测定法）。 光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。 ; 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法，按所用光的波长不同分为: 原子吸收光谱：利用物质的气态原子对特定波长的光的吸收来进行分析的方法。 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000?m （红外光区），主要用于有机化合物结构鉴定和定量分析。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?760nm （可见光区），主要用于有色物质的定量分析。 本章主要讲授紫外-可见吸光光度法。;第一节 分光光度分析的基本原理; 白光（ 400 -760 nm，日光、白炽灯光等）是一种复合光，它是由各种颜色的光按一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等不同颜色的单色光。 ;白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。能复合成白光的两种颜色的光叫互补色光。; 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。;2、透射比(透过度、透光率)T和吸光度; 布格尔(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系：A∝l ; A＝lg（I0/It)= klc A：吸光度，描述溶液对光的吸收程度； l：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的浓度，单位g·L-1 k：吸光系数，单位L·g-1·cm-1 ; A＝lg（I0/It)= εl c 式中 c：溶液的物质的量浓度，单位mol·L-1； ε：摩尔吸光系数，单位L·mol-1·cm-1；; 朗伯—比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量； ; 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 ;（1）单色光不纯引起的偏离 实际上，分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。;（3）与测定溶液有关的因素 朗伯—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用。这只有在稀溶液(c0.01mol/L)时才基本符合，当溶液浓度较高时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。故朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时，使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。;分光光度法主要应用于测试样中微量组分，与滴定分析、重量分析法相比，有如下特点： 1、灵敏度高 下限一般可达10-4-10-7g/mL 2、准确度高 相对误差1-3% 3、操作简便 4、测定快速 5、有一定的选择性 6、仪器简单;例题 ：已知某化合物的相对分子量为251，将此化合物用已醇作溶剂配成浓度为0.150 m mol / L溶液，在480nm处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数和吸光系数。;第二节 分光光度分析的样品前处理;第三节 分光光度分析的条件选择;吸收曲线的讨论;(5)在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。;显色反应----被测组分和某种试剂反应后生成有色物质的反应。 通过显色反应，可以加深被测组分的颜色。 显色反应的灵敏度用摩尔吸收系数ε表示。;灵敏度高--- εmax 最大； 选择性好---显色剂只与被测物质反应。 有色化合物组成固定---有定量关