含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化-中国药科大学学报.pdf

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１２，４３（３）：２７５－２８０ ２７５ 含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化 刘静娴，田　縥，姚文兵，陈　海，尹　骏，高向东 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰ｔＲＮＡ合成酶／ｔＲＮＡ系统，使用优化后的正交系 统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰ｔＲＮＡ合成 酶启动子－１５区的ＴＡＴＡＡ序列突变为ＴＴＡＡ序列，同时将正交酪氨酰ｔＲＮＡ合成酶的第２８６位天冬氨酸突变为精氨酸以 提高对抑制型ｔＲＮＡ反密码子ＣＵＡ的识别力。然后将质粒ｐＳＴ和ｐＥＴ３２ａｍｈＥｎ转化到大肠杆菌ＤＨ１０ＢＤＥ３中得到重组工 程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养，并经ＩＰＴＧ诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获 得人内皮抑素突变体，纯度大于９０