超声波与高压破碎细胞.docVIP

超声波和高压处理破碎细胞 摘要 当前 ，在对细胞破碎的所有的方法中，应用最广泛的是超声破碎和高压破碎法。在选择破碎方法时，要综合考虑的因素包括细胞类型及其存储和生长的过程、样品的数量和体积、破碎时间、破碎仪器的效率、破碎方法放大的潜力、对下游纯化工作的影响以及经济因素等，以避免破碎对目的蛋白的不良影响。本文主要论述了超声波破碎细胞与高压破碎细胞的比较。 关键词：超声波；细胞破碎；高压处理； TOC \o 1-3 \u 第一章 前言 2 第二章 常用的细胞破碎方法 2 2.1细胞方法概述及其机理 2 2.2机械法 2 2.3物理法 3 2.4化学及生物化学法 3 第三章 超声波及高压破碎 4 3.1超声波破碎及其机理 4 3.2高压破碎 4 3.3研究问题的由来 5 第四章 高压破碎细胞与超声波破碎细胞的比较 5 4.1样品处理速度 5 4.2操作技巧 5 4.3样品体积 6 4.4样品降解 6 4.5目标蛋白的要求 6 4.6应用范围 6 4.7样品的选择行 6 第五章 结论 7 参考文献 7 第一章 前言 破碎细胞是制备胞内蛋白的必经途径，目前用于细胞破碎的方法主要有超声破碎法和高压破碎法。但迄今为止这两种破碎方法对目标蛋白的影响并没有一个明确的结论。 超声破碎的机理涉及多种因素，包括空穴产生与复合伴随的高温(几千K)高压(几百个大气压)的变化、机械剪切力、气液界面的作用以及自由基的产生带来的理化效应[1]。超声可以使一些大分子降解、结构改变、形成聚集体以及化学键断裂等[2]。高压破碎的机理主要是由于样品流出时，细胞内外压力降低的速度不同，在膜两侧形成巨大压力差，使细胞膜破裂:出口处液体高速流动产生的剪切力也会导致细胞破裂[3]。高压处理还可用于乳化、制备脂质体以及降解高分子等[4]。 己有报道对两种方法的差别进行了探讨。在制备β－内酰胺酶和氯霉素乙酰基转移酶(CAT)时高压破碎效果要好。而在制备β－半乳糖苷酶和核酮糖－1, 5－二磷酸羧化酶/加氧酶时，超声要优于高压破碎。 第二章 常用的细胞破碎方法 2.1细胞方法概述及其机理 细胞膜将胞内包含物与环境分开，从而保证了细胞的完整性。细胞膜的弹性使细胞能够适应外界环境渗透压的急剧变化。在生命科学的研究中，通常要研究细胞内的大分子，如蛋白质、核算、酶等，所以第一步就要设法将胞内的物质释放出来，这个过程叫细胞破碎或裂解(cell disruption or lysis)。破碎方法的好坏会影响到产率和产物的正确功能状态。破碎方法选择不正确还可能使目的蛋白降解，无法获得想要的蛋白。因此，破碎方法是开展工作的重要一步。目前常用的主要的细胞破碎技术如下。 2.2机械法 1．组织捣碎机；一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm。以上。由于旋转刀片的机械切力很大，制备一些较大分子如核酸则很少使用。 2．匀浆器；匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离，破碎细胞的程度比组织捣碎机高。制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。 3．研钵；多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。 4．细菌磨；是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。 2.3物理法 主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有： 1．反复冻溶法；先将样品深冷冻固，再缓慢的融化，反复多次，多用于动物性材料。 2．急热骤冷法；将材料投入沸水中，维持85-90分钟，至水浴中急速冷却，此法可用于细菌及病毒材料。 3．超声波处理；频率一般选在10KHz至200KHz，功率200-500瓦范围，处理时间有数分钟至数十分钟不等，处理过程中注意冷却。此法多用于微生物材料。 4．高压破碎法；将细胞悬液增加到很高的压力，然后利用胞内压力变化比胞外慢而形成的压力差，将细胞破裂。 2.4化学及生物化学法 1．自溶法；在一定pH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间，常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。 2．酶溶法；利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏感，加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后，使之转为对溶菌酶敏感而溶解。 3．表面活性剂处理；如十二烷基硫酸钠、氯化十二烷基吡啶等。 第三章 超声波及高压破碎 3.1超声波破碎及其机理 超声波破碎细胞是指一种利用大功率超声处理化细胞，使其细胞内物质释放的方法，其作用原理主要有两方面，水力