线粒体tRNA的SNP与高血压和母系遗传高血压家系分析.pdfVIP

目州Ⅸ学R颟±学位论女 线粒体tRNA的SNP与高血压和母系遗传高血压家系研究 中文摘要 第一部分线粒体4个tRNA的SNP与高血压 目的 1．收集温“【地区原发性高血压患者样本．临床资料．了解温州地区原发性高 血压的发病特征，创建了温州地区原发性高血压遗传资源库。 2．针对原发性高血压人群中线粒体基因组内四个易感tRNA基因(tP,NAm、 tRNA yr、tRNA““、tRNA。y。)突变筛查，找出其中的变异位点。 3从线粒体基因组中寻找出4个IRNA基因的多态性位点，分析可能的作用。 方法 1．采集温州医学院附属第一心血管科高血压患者血液标本1822例．采集正 常健康人群血液标本514例，建立临床和分子遗传学资料数据库。 2 采用试剂盒提取所采集血液标本的基因组DNA．琼脂糖电泳检测结果。 3 运用PcR扩增技术对线粒体4个tRNA基因进行扩增，琼脂糖电泳检测结 果。PCR获得产物进行纯化，然后直接测序。 4 运用生物软件分析测序结果，寻找出tRNA中所有的多态性位点和突变位 点，计算突变频率。 5．针对筛选出来的tRNA的突变位点进行保守性，二级结构分析，进而找出 多态性位点阐述其在原发性高血压中可能的作用。 结果 l共收集到原发性高血压1822例．正常健康样本514例，建立了原发性高血 压的遗传学数据库。 2在原发性高血压患者组中，有129例患者携带线粒体tRNA基因点突变，其 83％。 概率为708％；正常健康组中有30例发生tRNA基因点突变．概率为5 2”、tRNAA“、 3．患者中有31个点突变发在4个易感tRNA|驷(tRNA‘rp、tRNA tRNAc”)，其中1】个位点没有报道，23个位点仅出现于患者组，9个位点 为患者与正常健康所菇有。 4在514例健康对照样本中，9W点突变发生在易感基因tRNA唧和tRNAq5 中，tRNAo”与tRNA““在对照组没有发生点突变。 5．按照1％的频率计算．仅tRNAc”582IAG的突变率为296％，属于多态性 aIHⅨ}％目±学＆论女 位点，文献已经报道的有17个，致病位点2个，12个有挣进一步证明。 6针对发现的2例携带tRNAl+基因55531C突变的先证者，随后进行家系采 访，完善临床赞料，发现2个具有典型的母系遗传家系．采取外周血-建 立永生化细胞株．探索其在原发性高血压发生、发展中的作用- l 患者tRNA基因突变率高于健康对照组．提示tRNA基因突变报可能是部分 原发性高血压发病机制，并为在细胞水平或体内研究tRNA基因突变对表 型的影响提供遗传资料基础。 96％，可以作为高血压的靶标。 2 5821AG的变异频率为2 检测到的tRNAcy5 3 携带有刚A砷5553CT突变的家系，该突变可能参与了高血压的发展。 日HⅨ￥％K±}＆*女 第二部分两个母系遗传高血压家系的研究 目的 1．探求两例携带tRNA忡5553CT的原发性高血压家系的临床表型、外显率 和表现度，分析该突变对患者表型的影响。 2 rp 针对两例携带tRNAl5553CT突变的原发性高血压家系的临床、迪传和 分子生物学特征进行分析，提出线粒体基因的突变，可能会导致线粒体 功能障碍，ATP能量缺失，进而引发临床表型发生．为原授性高血压的 遗传学的研宄提供新的视野。 方法 1 临床资料采集，包括先证者的血压值、血常规、血生化、发病史等。 2 线粒体基因组的全序扩增．PCR产物纯化后直接测序。 3 测序数据分析，运用生物信息