杨浦五角场新王牌补习班分解纤维素的微生物的分离.docxVIP

PAGE12 / NUMPAGES12 第4课时　分解纤维素的微生物的分离 [目标导读]　1.掌握纤维素酶的种类和作用及纤维素分解菌的筛选方法。 2.理解并掌握纤维素分解菌的筛选过程及刚果红染色法的原理。 3.掌握纤维素酶的测定方法。 [重难点击]　1.简述纤维素酶的种类及作用。2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。3.分析分离分解纤维素的微生物的实验流程，弄懂实验操作的原理。 一　纤维素分解菌的筛选的原理 1.纤维素与纤维素酶 (1)纤维素 据图，纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。 (2)纤维素酶 ①组成：一种复合酶，它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 ②作用 eq \x(纤维素)eq \o(―――――→,\s\up7(C1酶、CX酶))eq \x(纤维二糖)eq \o(―――――→,\s\up7(葡萄糖苷酶))eq \x(葡萄糖) (3)实验验证 试管 滤纸条 缓冲溶液 纤维素酶 (70～80 U/mL) 条件 结果 1 1×6 cm pH＝4.8的0.1 mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液10 mL 1 mL 两试管固定在50 mL锥形瓶中，在摇床上以140 r/min的转速振荡反应1 h 时间足够长，滤纸被完全分解 2 1×6 cm pH＝4.8的0.1 mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液11 mL 基本无变化 ①1个酶活力单位是指在温度为25 ℃，其他反应条件最适宜情况下，在1 min内转化1_mmol的底物所需要的酶量。 ②实验是如何构成对照的？ 答案　在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；尽管醋酸—醋酸钠缓冲液用量不同，但都能维持相同的pH。 2.纤维素分解菌的筛选 (1)方法：刚果红染色法。常用的有两种方法，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；另一种是在倒平板时就加入刚果红。 (2)原理：刚果红＋纤维素→红色复合物eq \o(――――→,\s\up7(纤维素酶))纤维素被分解，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 归纳提炼 两种刚果红染色法的比较 　项目 内容　 方法一 方法二 过程 培养基上长出菌落→覆盖质量浓度为1 mg/mL的CR溶液eq \o(――――→,\s\up7(10～15 min))倒去CR溶液→加入NaCl溶液eq \o(―――→,\s\up7(15 min))倒掉NaCl溶液→出现透明圈 配制CR溶液→灭菌→按照1 mL CR/200 mL培养基比例混匀→倒平板→培养→出现透明圈 优点 显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作简便，不存在菌落混杂问题 缺点 制作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂 ①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应；②有些微生物具有降解色素的能力，它们会降解刚果红形成透明圈，与纤维素分解菌不易区分 1.微生物体内能够使纤维素分解成纤维二糖的酶是(　　) A.C1酶和CX酶 B.C1酶和葡萄糖苷酶 C.CX酶和葡萄糖苷酶 D.C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 [问题导析]　纤维素是在C1酶和CX酶的作用下被分解为纤维二糖，葡萄糖苷酶可以将纤维二糖分解为葡萄糖。 解析　纤维素酶属于复合酶，至少包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。其中C1酶和CX酶使纤维素分解成纤维二糖。 2.鉴定纤维素分解菌时，可以使用刚果红对其染色，刚果红染色法有两种常用方法，两种刚果红染色法的结果是(　　) A.均会出现透明圈 B.方法一出现，方法二不出现 C.均不会出现透明圈 D.方法一不出现，方法二出现 [问题导析]　刚果红可以跟纤维素结合形成红色复合物，加入纤维素酶后纤维素被分解，不能形成红色复合物，从而出现透明圈。两种方法都能使纤维素分解，都能形成透明圈。 解析　两种刚果红染色法染色的时间不同，但结果一样，均出现透明圈。 二　实验设计与操作提示 结合实验原理和教材给出的资料，完成下面的实验方案流程图。 1.实验过程分析 eq \x(土壤取样)：选择富含纤维素的环境，如树林中多年形成的腐殖土 ↓ eq \x(选择培养?可省略?)eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(目的：增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从,　样品中分离到所需要的微生物,操作方法：将20克土样，在无菌条件下加入,　装有30 mL选择培养基的锥形瓶中，将瓶,　固定在摇床上，在一定温度下振荡培养,　1～2 d，直至培养液变混浊，也可重复