腺病毒介导CTLA4Ig转染正常人肝细胞株的研究.docVIP

腺病毒介导CTLA4Ig转染正常人肝细胞株的研究 刘潇聪，陈耀凯，李俊刚，刘国栋，谭朝霞，郭 艳，程玲，王宇明（重庆 400038 第三军医大学西南医院全军感染病研究所）【 【通信作者】[通信作者] 陈耀凯，电话：(023E-mail: yaokaichen@ [摘要] 目的 研究腺病毒介导CTLA4Ig基因转染正常人肝细胞株L02后，CTLA4Ig在L02细胞内的表达、生物学活性以及对L02细胞生物学特性的影响。方法 重组腺病毒载体Ad-CTLA4Ig-EGFP转染体外培养的正常人肝细胞株L02，观察绿色荧光在细胞内的表达情况。以免疫细胞化学、Western Blottingblot、ELISA等方法检测CTLA4Ig在L02细胞内、外的表达情况；通过绘制细胞生长曲线、检测尿素合成能力观察转染前后L02细胞的生物学特性；转染后的L02细胞与大鼠脾脏细胞共培养，通过检测脾脏细胞增殖情况评价表达CTLA4Ig的L02细胞在体外的免疫耐受活性；收集共培养体系中的大鼠脾脏细胞，再分别与正常L02细胞、HelaHeLa细胞共培养，检测脾细胞增殖情况以评价转染后L02细胞免疫耐受的特异性。结果 转染后的L02细胞可在细胞质内大量表达CTLA4Ig蛋白，并分泌至培养上清中；转染后L02细胞生长速度无明显改变（P＞0.05），尿素合成能明显升高（[(0.56±0