课题微生物的试验室培养一.docVIP

课题： 微生物的实验室培养一 主备：郑霞 第 1 课时 总第 课时 【教学目标】微生物的分离和培养A 【教学重点】微生物的分离和培养A 【教学难点】微生物的分离和培养A 【教 具】 【教学过程】 一．微生物的实验室培养 （一）培养基 （1）种类：培养基可分为液体培养基和固体培养基（按照物理性质）。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。 种类 特点及用途 物理性质 液体培养基 工业生产 半固体培养基 保藏菌种，观察微 生物运动 固体培养基 微 生物的分离、鉴定 化学成分 天然培养基 营养丰富、来源广，用于工业生产 合成培养基 成分明确稳定，用于分离、鉴定 用途 选择培养基 加入某种 化学物质以抑制不需要的微 生物的生长，促进所需要微 生物的生长，用于分离或培养目标细菌 鉴别培养基 根据微 生物的代谢特点，加入某种指示剂 化学物质，用于微 生物的鉴别 （2）成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气的要求（根据微生物的需求提供有氧或无氧环境）、特殊营养物质等。 碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+、蛋白质、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N2。 功能 举例 碳源 为微 生物提供碳素营养、能源物质，形成代谢产物，构成细胞成分 无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 氮源 为微 生物提供氮素营养、合成蛋白质、核酸、含氮代谢产物 无机化合物：氮、氨、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 酶和核酸组成成分，微 生物生长不可缺少微量有机物 维生素、氨基酸、碱基等 （3）配置原则：按微 生物种类、培养目的选择原料； 注意各种营养物质的浓度和比例；pH要适宜。 （二）无菌技术 （1）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 （2）消毒与灭菌的区别 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、红外线消毒。 灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 注意：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有的目的是：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （三）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 （2）倒平板操作的步骤： ①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。 ③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 ④等待平板冷却凝固，大约需5～10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。 注意： 1、确定培养基制作是否合格的方法：将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 2、倒置平板的目的是既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止培养皿盖上的冷凝水珠滴落到培养基表面，造成污染。 3、试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积 4、在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线、每次划线前及划线操作结束后，都要灼烧接种环，请分析其目的分别是：取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余每次划线前都要灼烧接种环的目的是消灭上次划线结束后接种环上残留菌种，使每次划线的菌种直接来自上次划线末端；最后灼烧接种环的目的是杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。 5、在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是：获得由单个细菌形成的标准菌落。 （四）纯化大肠杆菌 （1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。 （2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。 （