【生物课件】第四节 细菌病的实验室诊断方法.doc

PAGE PAGE 4 第一篇 微生物的基本知识 第一章 细 菌 第四节 细菌病的实验室诊断方法 细菌是自然界广泛存在的一种微生物，细菌性传染病占动物传染病的50%左右，细菌病的发生给畜牧业带来了极大的经济损失。因此在动物生产过程中，必须做好细菌病的防治工作。对于发病的群体，及时而准确地做出诊断是十分重要的。 畜禽细菌性传染病，除少数如破伤风等可根据流行病学、临床症状作出诊断外，多数还需要借助病理变化初步诊断，确诊则需在临床诊断的基础上进行实验室诊断，确定细菌的存在或检出特异性抗体。细菌病的实验室诊断需要在正确采集病料的基础上进行，常用的诊断方法有：细菌的形态检查、细菌的分离培养、细菌的生化试验、细菌的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。 一、病料的采集、保存及运送 （一）病料的采集 1．采集病料的原则 （1）无菌采病料原则 病料的采集要求进行无菌操作，所用器械、容器及其他物品均需事先灭菌。同时在采集病料时也要防止病原菌污染环境及造成人的感染。因此在尸体剖检前，首先将尸体在适当消毒液中浸泡消毒，打开胸腹腔后，应先取病料以备细菌学检验，然后再进行病理学检查。最后将剖检的尸体焚烧，或浸入消毒液中过夜，次日取出作深埋处理。剖检场地应选择易于消毒的地面或台面，如水泥地面等，剖检后操作者、用具及场地都要进行消毒或灭菌处理。 （2）适时采病料原则 病料一般采集于濒死或刚刚死亡的动物，若是死亡的动物，则应在动物死亡后立即采集，夏天不宜迟于6～8h，冬天不迟于24h。取得病料后，应立即送检。如不能立刻进行检验，应立即存放于冰箱中。若需要采血清测抗体，最好采发病初期和恢复期两个时期的血清。 （3）病料含病原多的原则 病料必须采自含病原菌最多的病变组织或脏器。 （4）采病料适量的原则 采集的病料不宜过少，以免在送检过程中细菌因干燥而死亡。病料的量至少是检测量的四倍。 2．采集病料的方法 （1）液体材料的采集方法 破溃的脓汁、胸腹水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入无菌试管内，塞好胶塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。若需分离血清，则采血后（一定不要加抗凝剂），放在灭菌的试管中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。方便时可直接无菌操作取液体涂片或接种适宜的培养基。 （2）实质脏器的采集方法 应在解剖尸体后立即采集。若剖检过程中被检器官被污染或剖开胸腹后时间过久，应先用烧红的铁片烧烙表面，或用酒精火焰灭菌后，在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌试管或平皿内。如剖检现场有细菌分离培养条件，直接以烧红的铁片烧烙脏器表面，然后用灭菌的接种环自烧烙的部位插入组织中，缓缓转动接种环，取少量组织或液体接种到适宜的培养基。 （3）肠道及其内容物的采集方法 肠道只需选择病变最明显的部分，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放在平皿内。粪便应采取新鲜的带有脓、血、黏液的部分，液态粪应采集絮状物。有时可将胃肠两端扎好剪下，保存送检。 （4）皮肤及羽毛的采集方法 皮肤要取病变明显且带有一部分正常皮肤的部位。被毛或羽毛要取病变明显部位，并带毛根，放入平皿内。 （5）胎儿 可将流产胎儿及胎盘、羊水等送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检。 （二）病料的保存与运送 供细菌检验的病料，若能1～2d内送到实验室，可放在有冰的保温瓶或4～10℃冰箱内，也可放入灭菌液体石蜡或30%甘油盐水缓冲保存液中（甘油300ml，氯化钠4.2g，磷酸氢二钾3.1g，磷酸二氢钾1.0g，0.02%酚红1.5ml，蒸馏水加至1000ml， 供细菌学检验的病料，最好及时由专人送检，并带好说明，内容包括：送检单位、地址、动物品种、性别、日龄、送检的病料种类和数量、检验目的、保存方法、死亡日期、送检日期、送检者姓名、并附临床病例摘要（发病时间、死亡情况、临床表现、免疫和用药情况等）。 二、细菌的形态检查 细菌的形态检查是细菌检验技术的重要手段之一。在细菌病的实验室诊断中，形态检查的应用有两个时机，一是将病料涂片染色镜检，它有助于对细菌的初步认识，也是决定是否进行细菌分离培养的重要依据，有时通过这一环节即可得到确切诊断。如禽霍乱和炭疽的诊断有时可通过病料组织触片、染色、镜检即可确诊（图1-36、1-37）。另一个时机是在细菌的分离培养之后，将细菌培养物涂片染色，观察细菌的形态、排列及染色特性（图1-38、1-39），这是鉴定分离菌的基本方法之一，也是进一步生化鉴定、血清学鉴定的前提。 常用的染色方法本章第一节已讲述，包括单染色法和复染色法，应用时可根据实际