不同药物长期镇静对大鼠认知功能及海马RAGE表达的影响.docVIP

PAGE PAGE 1 不同药物长期镇静对大鼠认知功能及海马RAGE表达的影响 　　【摘要】目的本研究拟观察咪达唑仑、异丙酚长期镇静对大鼠认知功能及海马高级糖基化终末产物受体（RAGE）蛋白表达的影响及认知功能改变与海马RAGE蛋白表达有无关系，为临床提供依据。方法①选取成年雄性wistar大鼠20只，随机分为对照组、咪达唑仑组、异丙酚组。②预实验找出使大鼠反正反射消失的剂量，腹腔注射此剂量。再给予实验组镇静作用的基本剂量，每天连续输注8小时，连续给药5天，对照组给予生理盐水。于完全停药后1天，应用Morris水迷宫对三组大鼠开始连续5天的行为学观察，记录逃逸潜伏期和空间探索时间。③大鼠末次水迷宫测试1h后，取大鼠海马，用免疫组织化学法测定RAGE蛋白的表达。结果（1）定位航行试验：①与对照组比较，其余两组在第1-4天逃逸潜伏期延长（P0.05）。②与第1天比较，对照组的第2、4天逃逸潜伏期缩短（P0.05）；咪达唑仑组在4个时点逃逸潜伏期无差异；异丙酚组与第1天比较第4天逃逸潜伏期缩短（P0.05）。（2）空间探索试验结果：与对照组比较，咪达唑仑组、异丙酚组空间探索时间缩短，穿越平台次数减少（P0.05）。（3）免疫组化法测定RAGE蛋白结果：与对照组比较，咪达唑仑组、异丙酚组海马CA1区RAGE免疫组化染色阳性细胞数增加（P 　　【关键词】咪达唑仑；异丙酚；长期镇静；认知功能障碍；RAGE蛋白 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.03.025文章编号：1004-7484（2013）-03-1028-03 　　镇静治疗作为重症医学科患者的常规治疗，是指应用药物手段减轻患者焦虑和躁动，催眠并诱导顺行性遗忘的治疗。认知功能障碍表现为精神错乱、焦虑、性格的改变即记忆受损。对于一些患者，短暂的（数周至数月）认知功能损害仅会带来一些烦恼，而持久的损害则会使患者丧失工作能力，并带来灾难性后果。但目前对长期镇静对认知功能影响的研究报道甚少，其影响机制也尚不清楚。高级糖基化终末产物受体（RAGE）在神经系统疾病损害中起重要的信号转导作用，是阿尔茨海默病的典型病理变化。RAGE在不同的种属间显示了高度的同源性，人、大鼠、小鼠、牛的RAGEcDNA约90%相似。RAGE是细胞表面分子免疫球蛋白超家族的一个成员、是存在于细胞膜表面的一种多配体受体。RAGE在与配体结合后，趋化和连接细胞内信号转导分子，产生生物学效应[1]。而RAGE是否参与了镇静药物所致的认知功能改变尚缺乏足够研究证据。因此本研究拟通过观察不同药物长期镇静对大鼠行为学及海马RAGE表达影响，探讨其导致认知功能减退的机制。 　　异丙酚作为重症患者临床上应用最为广泛的镇静药物之一，其临床特点是起效迅速，无明显蓄积，苏醒快而完全。该药的作用机制尚不完全明了，异丙酚是烷基酚的衍生物，具有脂溶性，在肝内与葡萄糖醛酸和硫酸盐的共轭作用，很快代谢为水溶性的化合物而经肾脏排泄，其代谢产物无药理活性，适合于连续输注。异丙酚对中枢神经系统多种受体及离子通道有不同程度的影响，如钠离子通道，GABA受体等。病人血浆异丙酚浓度与其镇静麻醉深度密切相关。PainL等[2]发现给大鼠腹腔注射低于镇静剂量的异丙酚，结果发现大鼠的记忆能力仍受到损伤。 　　咪达唑仑为新一代苯二氮卓类药物，具有水溶性，具有明显的镇静、肌松、抗惊厥、抗焦虑药理作用。肌注或静注后，可产生短暂的顺行性记忆缺失，使患者不能回忆起在药物高峰期间所发生的事情。主要代谢物1-羟基咪达唑仑迅速与葡萄糖醛酸结合，呈无活性的代谢物。有研究表明，咪达唑仑能够引起学习、记忆等认知功能损害等不良反应，[3]，其机制[4]可能主要与活化大鼠海马GABA受体有关。 　　目前已有一些研究者发现吸入麻醉药异氟醚可导致老龄和成年大鼠认知功能降低，尤其对老龄大鼠影响明显，可能与其上调海马RAGE表达有关[5]。 　　因此，本研究拟采用Morris水迷宫行为学检测不同药物长期镇静和同一药物的不同时间对成年大鼠空间学习记忆能力的影响；拟采用免疫组织化学染色法检测大鼠海马RAGE表达的影响，探讨其导致认知功能减退的机制。 　　1材料 　　1.1材料异丙酚注射液、咪达唑仑注射液、大鼠RAGEIHC试剂盒DAB显色试剂盒、生理盐水。 　　1.2动物选择及分组雄性4月龄成年wistar大鼠（内蒙古大学实验动物中心提供），体质量160-230g。大鼠行一次水迷宫测试，剔除有明显运动障碍的大鼠。选取大鼠20只，随机分为对照组、异丙酚组、咪达唑仑组。 　　2方法 　　2.1给药预实验找出使大鼠翻正反射消失的异丙酚及咪达唑仑剂量，腹腔注射此剂量。异丙酚腹腔注射30mg/kg，咪达唑仑腹腔注射3mg/kg。尾静脉穿刺留置静脉导管。根据人的常规