蛙心灌流全套完整课件.ppt

蛙心灌流 心脏具有自动节律性。离体心脏用理化性质近似于血浆的生理溶液（任氏液）进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持较长时间。 心脏正常节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以改变灌流液成分，则可引起心脏活动的改变。 心肌细胞生物电活动的基础是钠、钾、钙等跨膜离子流。因此细胞外液中这些离子浓度的变化会对心脏的活动产生不同的影响。 调节心脏活动的神经、体液因素对心脏活动的直接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应受体结合，导致心脏活动的增强或减弱。乙酰胆碱与去甲肾上腺素就是通过这种方式发挥作用的。 实验目的 学习离体蛙心的灌流方法 观察钠、钾、钙三种离子、肾上腺素和乙酰胆碱对心脏活动的影响 方法和步骤 破坏脑和脊髓 开胸，暴露心脏 蛙心插管 结扎静脉窦 连接装置 观察项目 正常的蛙心搏动曲线 用0.65％ NaCl替换任氏液 在任氏液中滴加2％ CaCl2 1-2滴 在任氏液中滴加1% KCl 1-2滴 在任氏液中滴加1:10000 肾上腺素1-2滴 在任氏液中滴加1:10000 乙酰胆碱1-2滴 注意事项 游离蛙心时，勿伤及静脉窦，要连静脉窦一起取下 蛙心插管内液面应保持恒定 进行各观察项目时，作用明显后应立即用新鲜任氏液换洗，待心跳恢复正常后方可进行下一步实验 滴加药品时，要及时标记 滴加药品后，可用滴管混匀 结果与讨论 心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外钙离子的浓度成正比。 曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。 曲线密度：代表心跳频率。 曲线的规律性：代表心跳的节律性。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 　曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。 正常蛙心收缩曲线 0.65% NaCl 低Ca离子 心肌细胞动作电位2期Ca内流 胞浆内Ca离子浓度 心肌的收缩活动 1. 长时间用0.65％NaCl溶液灌注蛙心，心脏最终会停止收缩，但仍能产生动作电位，这种现象称为兴奋－收缩脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca离子的表现。 2% CaCl2 高Ca离子 2. 收缩增强 心脏 舒张不全 在Ca离子浓度较高的情况下，心脏会停止在收缩状态，称为钙僵。 1% KCl 高 K＋离子 3. K+与Ca2+拮抗 Ca2+ 平台期缩短 Na+通道失活 兴奋性丧失 收缩力 心肌停跳于舒张期 4. 灌流液中加入肾上腺素后，曲线幅度明显加大，可见蛙心收缩增强，基线下降，说明心脏舒张完全，从而提高心输出量。肾上腺具有正性变力，正性变时，正性变传导作用。 促肌钙蛋白对Ca2+的释放 提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度 肾上腺素 心肌细胞上的β受体相结合 ATP [cAMP] 心肌膜上Ca通道开放概率增加 肌浆中Ca2+浓度升高 心肌收缩增强 心肌舒张速度增快，舒张完全。 加强4期的内向电流，使自动去极化速率加快，窦房结自律性频率变高，心率加快 慢反应细胞0期动作电位的上升幅度增大，去极化加快，房室传导时间缩短 乙酰胆碱使得蛙心收缩减弱，收缩曲线基线下移，心率减慢。 乙酰胆碱 心肌细胞膜上M型受体结合 ATP [cAMP] 心肌膜上Ca通道开放概率降低 肌浆中Ca2+浓度降低 心肌收缩减弱 慢反应细胞0期动作电位的上升幅度减少，上升速率减慢，房室传导速率减慢 激活细胞膜上的一种K+通道，促进胞内K+外流，最大复极电位更负。窦房结自律性频率降低，心率减慢。并且抑制4期的内向电流也导致心率减慢。 5. 思考与探讨 为何常用离体蛙心，而不常用离体哺乳动物的心脏做心脏灌流实验？ 蛙心插管插入心室时，是在收缩期还是舒张期插入？为什么？ 实验过程中，为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？ 蛙心灌流实验过程中，为什么不能改变蛙心与换能器连线的张力？ 蛙心插管插入心室时，是在收缩期还是舒张期插入？为什么？ 实验过程中，为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？ 蛙心灌流实验过程中，为什么不能改变蛙心与换能器连线的张力？