目的基因的PCR扩增及扩增产物鉴定分析报告.pptVIP

目的基因的PCR扩增 及其扩增产物的鉴定分析 ;此实验共包括如下六个部分 第一部分，目的基因选择 第二部分，PCR引物设计 第三部分，PCR实验操作 第四部分，PCR产物电泳鉴定 第五部分，PCR产物测序鉴定 第六部分，目的基因序列变异分析 ;第一部分 目的基因选择;NGAL（neutrophil gelatinase-associated lipocalin）即中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白，是脂质运载蛋白（lipocalin) 家族的一个成员。 NGAL基因的蛋白产物具有保护调节基质金属蛋白酶-9的活性，作为小分子铁配合物结合蛋白参与机体铁代谢和天然免疫反应等功能。另外，NGAL作为一种早期标志物还可以帮助判定缺血性肾损伤程度。 ;;NGAL核酸编码区序列及其相应的蛋白序列：;2001年汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室李恩民课题组以永生化食管上皮细胞系SHEE 和食管癌细胞系SHEEC 互为对照，用cDNA 微列阵进行筛选，用RNA 印迹和RT-PCR 进行鉴定，cDNA 克隆测序后与GenBank 进行BLAST 分析比较。结果表明NGAL 基因在SHEEC中出现显著差异过表达，其cDNA 序列与小鼠24p3、大鼠NRL (neu-related lipocalin) 和人中性粒细胞NGAL 具有较高的相似性。这提示NGAL 基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中