基本原理与主要分离类型.pptVIP

一、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 二、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下： 阳离子交换： 四、 离子色谱ion chromatography 六、 排阻色谱色谱size- exclusion chromatography 七、 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 八、液相色谱的流动相 mobile phases of LC 2. 流动相类别 3. 流动相选择 * * HPLC 液-固吸附 液-液分配 正相色谱 反相色谱 一般反相色谱 离子对色谱 离子抑制色谱 离子交换色谱 一般离子交换色谱 离子色谱 氨基酸分析 空间排斥色谱 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 假相色谱 胶束色谱 环糊精色谱 亲合色谱，手性色谱，毛细管电泳 键合相色谱 固定相：固体吸附剂如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂，相似相溶，即极性大的试样用较强的流动相，反之亦然。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 吸附剂含水量是控制吸附剂活性，影响溶质保留的重要因素。 当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，只要它们在固定相有一定程度的保留就要取代数目相当的已被吸附的流动相（溶剂分用）于是，在固定相表面发生竞争吸附: 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 按结构分，键合相可分为四种键型： （1）硅酸酯型（≡Si-O-C≡）键合相 （2）硅氮型（ ≡ Si-N ≡ ）键合相 （3）硅碳型（ ≡ Si-C ≡ ）键合相 （4）硅氧烷型（ ≡ Si-O-Si-C ≡ ）键合相 按极性分，键合相可分为三种 （1）非极性键合相 （2）弱极性键合固定相 （3）极性键合相 （1）非极性键合相 表面基团为非极性羟基，如十八烷基（C18）、辛烷基（C8）、甲基（C1）、苯基等。 常用于反相色谱 非极性键合相的烷基链越长，稳定性越好，溶质的K越大，载样量越高，分离选择性越好。 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 （2）弱极性键合固定相 常见的有醚基和二羟基键合相 可用于正相或反相色谱 （3）极性键合相 氨基键合相： 硅胶-氨丙硅烷基[－Si－(CH2)3NH2] 氰基键合相： 硅胶-氰乙硅烷基[－Si－(CH2)2CN] 一般用于正相色谱 表示方法： 国产：YWG-C18H37 YQG-C18H37 YWG-CN YQG-NH2 YWG-C6H5 进口：Spherisorb ODS Lichrosorb -CN 特点： 1）不易流失； 2）热稳定性好； 3）化学性能好：可键合不同官能团，提高选择性； 4）载样量大； 5）适于梯度洗脱 存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 使用时应注意： 1）流动相pH应在2～8，否则会引起硅胶溶解 2）不同厂家，不同批号的同一类型键合相也可能表现不同的色谱