Exendin-4类似物的克隆、表达与体内生物活性检测.PDFVIP

李泰明 等/Exendin-4 类似物的克隆、表达与体内生物活性检测 877 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology July 25, 2012, 28(7): 877−886 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 Exendin-4 李泰明，谷春娇，葛晓宇，李哲哲，王丹，马艳红，刘涛，张美由，李丽，刘景晶 中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室，江苏 南京 210009 李泰明, 谷春娇, 葛晓宇, 等. Exendin-4 类似物的克隆、表达与体内生物活性检测. 生物工程学报, 2012, 28(7): 877−886. Li TM, Gu CJ, Ge XY, et al. Cloning, expressing of Exendin-4 analogue and bioactivity analysis in vivo. Chin J Biotech, 2012, 28(7): 877−886. 摘 要: 为研究Exendin-4 类似物的克隆，融合表达及在体内的生物活性，在pED 载体融合伴侣序列中插入 利于下游分离纯化的序列成为 5 ＃载体，将Exendin-4 类似物基因与 5 ＃载体中的融合伴侣基因通过酸水解位 点连接，转化至E. coli BL21 中并诱导表达融合蛋白，酸水解将目的肽与融合伴侣分开后，经阴离子交换树脂 分离得到目的肽。6 周~8 周正常雄性ICR 小鼠皮下注射Exendin-4 类似物后，口服糖耐量实验检测在不同时间 段小鼠血液中葡萄糖及胰岛素含量的变化。结果表明：融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40 ％，Exendin-4 类 似物纯度达 91.8 ％。Exendin-4 类似物的活性与对照组相比，具有显著的降低血糖和显著促进胰岛素分泌的活 性 (P0.01) 。 关键词: Exendin-4 类似物，生物活性，血糖，胰岛素 Cloning, expressing of Exendin-4 analogue and bioactivity analysis in vivo Taiming Li, Chunjiao Gu, Xiaoyu Ge, Zhezhe Li, Dan Wang, Yanhong Ma, Tao Liu, Meiyou Zhang, Li Li, and Jingjing Liu State Key Laboratory of Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, Jiangsu, China Abstract: To construct, express and purify Exendin-4 analogue and detect its biological activity in vivo. Insert gene sequence Received: December 27, 2011; Accepted: April 20, 2012 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2002AA217031-2), National Natural Science Foundation (No., Jiangsu Municipal Natural Science Foundation (Nos. B BG2001011), Nati