《边做边学 目的DNA片段的体外扩增》课件1.pptVIP

教师用书独具演示;●课标解读 1．掌握聚合酶钙反应的原理与程序。 2．理解RCR实施方法与PCR仪使用的安全措施等。 ●教学地位 本节内容涉及到使用PCR仪的安全措施、聚合酶链式反应程序、目的DNA片段的体外扩增等内容，该部分内容是本章的核心内容之一，是高考常考点。 ●教法指导 1．可通过多媒体课件展示PCR仪的使用。 2．尽可能创造条件让学生完成实验操作。 ;●新课导入建议 可通过展示科研人员正在进行使用PCR技术进行目的DNA分子片段扩增的实验引入本课。;●教学流程设计;演示结束;课　标　解　读;使用PCR仪的安全措施 ;电源 ;聚合酶链式反应程序 ;目的DNA片段的体外扩增 ;94 ℃ ;二苯胺试剂 ;1．DNA扩增的变性过程中需要DNA解旋酶的参与。 (×) 【提示】　是在94 ℃高温解链，不需DNA解旋酶的参与。 2．DNA扩增退火过程中需要DNA聚合酶参与。(×) 【提示】　只需将温度降至40～60 ℃，使引物与模板配对。 3．DNA延伸过程需要Taq聚合酶的作用。(√) 4．所有PCR中使用的引物都是相同的。(×) 【提示】　引物的序列是依据被扩增区域的3′端边界DNA序列确定的。;PCR技术的反应原理与反应过程 ;3．PCR扩增的计算 理论上DNA呈指数方式扩增。若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后有2n个；若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为N0·2n个。;(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开 键，称为 。 (2)当温度降低时，引物与模板 端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两个DNA分子，此过程中原料是 ，遵循的原则是 。 (3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、酶以外，至少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的温度和酸碱度，适宜的温度由 自动调控，酸碱度则靠 来维持。;(4)DNA的复制需要引物，其主要原因是(　　) A．可加快DNA的复制速度 B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合 C．引物的5′端有助于DNA聚合酶延伸DNA链 D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链;【精讲精析】　(1)PCR技术利用热变性原理使DNA双链间的氢键断裂，称为变性。 (2)PCR技术扩增DNA与细胞内DNA复制所需原料一样，为腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸，遵循的原则是碱基互补配对原则。引物与模板的3′端结合后，DNA聚合酶才发挥作用。 (3)PCR技术除了需要模板、原料、酶以外，至少还需要液体环境、适宜的温度和酸碱度，适宜的温度靠PCR仪自动调控，而酸碱度靠缓冲液来维持。;(4)引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸的起始位点，而DNA聚合酶的作用是从引物的3′端开始催化DNA链的延伸，故选D。 【答案】　(1)氢　变性　(2)3′　四种脱氧核苷酸　碱基互补配对原则　(3)PCR仪　缓冲液　(4)D;【解析】　由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物，而且它与DNA母链通过碱基互补配对结合。PCR扩增的对象是DNA，而不是氨基酸。 【答案】　C;实验操作的注意事项 ;3．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。 4．PCR实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等，均有可能导致DNA片段扩增的失败。 5．PCR扩增的是位于两种引物之间的DNA片段，合理设计引物是PCR成功的关键。;【精讲精析】　为了防止外源DNA等因素的污染，PCR反应中所用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水等，在使用前要进行高压灭菌；还要将所用的缓冲液和酶分装成小份；并且使用一次性吸液枪头，则A、B、D项都正确。在使用前，将PCR所需试剂从冰箱内拿出来，放在冰块上缓慢融化，则C项错误。 【答案】　C;【解析】　为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。使用前，将所需的试剂从冰箱内拿出，放在冰块上缓慢融化。 【答案】　C;结 论 语 句 1．聚合酶链式反应，简称PCR，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的实验技术。 2．向离心管中加入模板DNA、脱氧核苷酸引物和4种脱氧核苷酸以及Taq聚合酶。 3．变性是在94 ℃高温下使模板双链DNA解旋。 4．退火是将反应体系温度降至40～60 ℃，使引物与模板DNA链配对。 5．延伸是将反应体系温度回升至72 ℃左右，在Taq聚合酶作用下，使引物链延伸，形成互补的DNA双链