色谱绪论.ppt

1. A─涡流扩散项 A = 2λdp dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 固定相颗粒dp↓，填充得越均匀，λ↓， A↓，H↓，柱效n↑，涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄。对于空心毛细管柱，A=0。 样品中各组分同时加到层析柱入口端，但组分中的各分子随流动相在柱内流过的路径不同，耽搁的时间也不同，因此不能同时从层析柱流出，导致色谱峰变宽。 3. B/u —纵向扩散项（分子扩散项）。由于浓度梯度，试样组分谱带随着流动相前移时，会向谱带前后扩散，导致色谱峰变宽 γ ：自由扩散程度因子，也称为弯曲因子。空心毛细管中组分分子可以自由扩散，扩散程度最大,γ=1；填充柱色谱中组分分子的自由扩散受到固定相颗粒的障碍，扩散程度减小,γ 1。 Dg：试样组分分子在流动相中的扩散系数（cm2·s-1）。 (1) 扩散系数Dg与组分及载气的性质有关： Dg ∝(M载气)-1/2 ； M载气↑，B值↓。 Dg ∝(M组分)-1 (2) 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，分子扩散↑; (3)扩散系数Dg随柱温Tc升高而增加, Tc ↓,分子扩散↓ 。 B = 2 γ Dg 4. C ·u —传质阻抗项 溶质随流动相进入色谱柱，由于分子扩散作用，溶质经流动相与固定相的界面进入固定相被吸附或吸收，在两相中达到平衡。载气处于连续流动状态，未能进入固定相的溶质分子被载气推着前进，发生分子超前，有些溶质在固定相中未能及时解析进入流动相，发生分子滞后，由此导致谱带变宽。 C =Cg+Cl  C: 传质阻抗系数 Cg : 气相传质阻抗系数 Cl : 液相传质阻抗系数 q为由固定相颗粒形状及孔结构决定的参数。 k为容量因子； DL为溶质在固定液中的扩散系数；df是固定液膜的厚度。 气相色谱中，载气对溶质分子的传质阻力很小，可或略不计，仅需考虑固定液对溶质分子的液相传质阻力系数CL ，即： 减小ＣL的措施： (1) 降低固定液液膜厚度并且液膜要均匀；若膜厚，扩散导致滞后；但不能太薄，否则包不住载体。 (2) DL越大越好，增加柱温是提高DL的方法之一。 5. 速率理论的要点 组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间达到等因素是造成色谱峰扩展、柱效下降的主要原因。 速率理论表明：各种因素相互制约，如载气流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子扩散的影响。选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 五、 色谱分离度方程 对于被分析样品中的难分离物质对1与2，由于二者的物理化学性质很接近，故可合理认为：相邻两峰宽近似相等，即 Wb2 = Wb1=Wb，可导出下式： 式中， n: 柱效因子； α：选择性因子； k: 容量因子 影响分离度的因素 增大n提高柱效，但不改变柱长，则峰变窄，出峰时间不变。 增大k，改善分离，峰变宽；由于被固定相强保持，出峰时间延长。 增大α，峰之间的距离拉大，出峰时间可能变化，是最有效的改善分离措施。 分离效果的判断 (a)选择性及柱效都不好 (b)选择性好，峰间距大，柱效不好，峰胖； (c) 柱效好，选择性如果能够提高一些，则更好。 例1：在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为85秒和100秒，要达到完全分离，即R=1.5，计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1 cm，柱长是多少？ 解： α= 100 / 85 = 1.18 n有效 = 16R2 [α / (α —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（块） L有效 = n有效·H有效 = 1547×0.1 = 155 cm 即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。 例2：在3.0m色谱柱上，分离A、B组分，其保留时间分别为14.0min、17.0min，不被保留的组分的保留时间为1.0min，B 组分的峰底宽度Wb为1.0min。计算A和B达到基线分离时（R=1.5）的柱长为多少？ 解： B组分的有效塔板数： 达到R=1.5时，需要的有效塔板数： 由于n∝L，则要达到基线分离需要的柱长为： 所以 L需=0.75m，要达到基线分离，所需柱长为0.75m。 六、基本类型色谱法的分离机理 吸附色谱法 流动相中的溶质分子Xm竞争置换出 吸附剂活性位点上被吸附的n个溶剂分子Ya. 流动相中溶剂