基因组工程在微生物细胞工厂构建中的应用进展-生物产业技术.PDF

特 约 评 述 基因组工程在微生物细胞工厂构建中的 应用进展 1 1 1 2 何庆 ，王茜 ，朱清华 ，方宏清 1. 德州学院生命科学学院，德州　253023 2. 安徽大学健康科学研究院，合肥　230601 摘要：微生物细胞工厂是以可再生资源为原料，通过微生物细胞转化制备人类所需的能源、药物、化工原料等等， 或者利用微生物治理日益恶化的环境。应用基因组工程改造目标微生物可以进一步提升其应用潜力，更好地解决 当今所面临的健康、能源和环保等问题。简述了目前主要的基因组改造技术及其在构建大肠杆菌、酵母、链霉菌、 枯草芽孢杆菌和乳酸菌细胞工厂中的应用研究进展。 关键词：基因组工程；微生物细胞工厂；合成生物学 DOI: 10.3969/j.issn.1674-0319.2017.01.005 基因组工程是指为了实现某一目标对复制 1　基因组改造技术 系统进行有意的、广泛的遗传修饰。目前，人们 对基因组工程的研究正处于快速上升时期。以微 基因组靶向编辑指在基因组 DNA 的预定位点 生物细胞工厂替代传统化工厂，将可再生资源转 上，精确地改变 DNA 序列，包括插入、缺失和置换 化为人类所需的能源、药物、化工原料等，是绿 等，进而改变基因的结构或功能。该技术是微生物 色发展的重要途径之一。目前， 以基因组工程为 细胞工厂构建中最常用的技术。 基础的微生物细胞工厂的构建主要有两条技术路 线：合成简约化的基因组；剔除赘余基因以获得 1.1　 Red 同源重组和CRISPR 技术λ 简约化的基因组。第一条技术路线是以人们对生 物体系研究所获得的技术与知识为基础，将零部 λ Red 同源重组是一项可在染色体水平进行遗 件一步步组建成生物体，重塑生命是其核心思想。 传操作的技术，只需较短的同源序列，不需要特定 第二条技术路线为大多数研究人员所采用，它主 的限制性酶切位点，即可在生物体内完成重组过 要针对遗传背景较为清晰的微生物，通过对其基 程。而 CRISPR/Cas9 （clustered regularly interspersed 因组的结构和序列进行分析，分批次敲除非必需 short palindromic repeats/Cas9 ）技术是由RNA 指导 或赘余的基因序列，或通过添加 DNA 序列增加 Cas9 蛋白对靶基因进行修饰，具有组成简单、价格 新的功能，提高细胞对底物和能量的利用率以及 低廉、安全性高、切点相对精确、具有可逆性、可 生产性能。 同时对多个基因位点进行编辑的优点，被广泛应用 在不同微生物中（表 1）。 λ 通讯作者：方宏清，博士，安徽大学兼职讲席教授。研究方向：微 目前，人们致力于将 Red 重组酶与 CRISPR/ 生物基因工程药物、微生物基因组工程及合成生物学。E-mail ： λ Cas 技术相结合，结合后的系统不仅能够发挥 Red 重 fanghongqing@ 组酶高效重组的优点，还利用了 CRISPR/Cas 识别特 基金项目：国家“973 ”计划项目（2011CBA00800 ），国家自然科 学基金面上项目（课题编号） 异