体外奶牛乳腺炎上皮细胞模型的建立-中国科技论文在线.PDF

第10卷第9 期 Vol.10 No.9 2017 年 5 月 May 2017 体外奶牛乳腺炎上皮细胞模型的建立 1 1 1 1, 2 1, 2* 张文耀 ，陈 青 ，和桂良 ，张 涌 ，高明清 （1. 西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100 ； 2. 西北农林科技大学农业部生物技术重点实验室，陕西杨凌 712100 ） 摘要：目的：体外建立奶牛乳腺炎上皮细胞模型。方法：体外培养奶牛乳腺上皮细胞，用不同浓度（0 ，l ，5 ， 10，20 ng/µL ）脂多糖（lipopolysaccharides ，LPS ）或不同浓度（0 ，1，10，20 ，40 ng/µL ）脂磷壁酸（lipoteichoic acid ，LTA ）处理奶牛乳腺上皮细胞，采用实时荧光定量PCR （quantitative real-time PCR ，qRT-PCR ）检测炎 性应答标志肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的基因表达水平，酶联免疫吸附实验（enzymes linked immunosorbent assay ，ELISA ）检测炎性应答标志TNF-α 的蛋白表达水平，进而确定建立模型的LPS 和LTA 最适处理浓度。然后在确定的最适浓度下，分别以LPS 或LTA 处理上皮细胞不同时间［LPS （0 ，3 ，6 h ）或 LTA （0 ，3 ，6 ，12，24 h ）］，采用qRT-PCR 检测炎性应答标志TNF-α 的基因表达水平，以确定建立模型的最 佳处理时间。结果：qRT-PCR 和ELISA 实验结果显示LPS 浓度10 ng/µL 处理乳腺上皮细胞3 h 可明显诱导TNF-α 基因和蛋白表达水平；LTA 浓度20 ng/µL 处理乳腺上皮细胞12 h 明显诱导TNF-α基因和蛋白表达水平。结论： 本实验成功地建立了LPS 或LTA 诱导体外培养奶牛乳腺上皮细胞的乳腺炎细胞模型。 关键词：兽医学；乳腺炎；脂多糖；脂磷壁酸；乳腺上皮细胞；奶牛 中图分类号：S852.34 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2017)09-1037-06 Establishment of a cell model of bovine mastitis in vitro 1 1 1 1, 2 1, 2 ZHANG Wenyao , CHEN Qing , HE Guiliang , ZHANG Yong , GAO Mingqing (1. College of Veterinary Medicine, Northwest AF University, Yangling, Shaanxi 712100, China; 2. Key Laboratory of Animal Biotechnology, Ministry of Agriculture , Northwest AF University, Yangling, Shaanxi 712100, China) Abstract: Objective: To establish an in vitro epithelial cell model of bovi