培养基性能测试指南.docVIP

惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/ZN-06-2009 培养基性能测试指南 版本 / 修改次：1/0 第 1 页 共 4 页 1. 目的 规范本中心微生物实验室对培养基性能测试的方法。 2. 适用范围 本指南适用于固体和液体培养基的性能测试方法。 3. 职责 3.1 检验人员：按照本指南规定的方法对培养基性能进行测试。 3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基性能进行测试。 4.培养基性能测试方法 4.1概述 通常使用半定量和定性测试方法就能满足实验室对培养基性能测试的要求；评价新的培养基或新的供应商的产品时，应采用定量方法。 本指南中所提到的接种环是直径为3mm的接种环。 4.2测试菌株 4.2.1工作菌株的使用及管理 工作菌株的使用及管理详见作业指导书《菌种管理工作指南》HSCDC/ZN-05-2009。 4.2.2 工作菌株的制备 工作菌株是将标准储备菌株接种到非选择性肉汤（如营养肉汤）中所制备的处于稳定生长期的纯菌株。 4.2.2.1 工作菌株定量菌液的制备 4.2.2.1.1标准储备菌株接种到营养肉汤中培养18～24小时，用生理盐水配成0.5麦氏单位，再用生理盐水稀释至实验所需的稀释度。 4.2.2.1.2 0.5麦氏比浊管对应的菌液浓度约为108/mL，以下是几种常用细菌的比浊标准（0.5麦氏单位）。 肺炎双球菌 3×108/mL 痢疾志贺氏菌 8×108/mL 大肠埃希氏菌 8×108/mL 福氏志贺氏菌 8×108/mL 铜绿假单胞菌 10×108/mL 宋内氏志贺氏菌 8×108/mL 甲型副伤寒沙门氏菌 10×108/mL 甲型溶血性链球菌 2×108/mL 乙型副伤寒沙门氏菌 10×108/mL 霍乱弧菌 18×108/mL 伤寒沙门氏菌 10×108/mL EL-Tor O1群霍乱弧菌 18×108/mL 4.2.2.2 麦氏比浊管 4.2.2.2.1 0.5麦氏比浊管的配制 0.5mL BaCl2（1.175%,w/v）＋99.5mL H2SO4（1%,v/v）充分混匀后，每管分装4～6ml,封口后置室温暗处保存。也可购买使用麦氏标准比浊管。 4.2.2.2.2 0.5麦氏比浊管的校准 用光径为1cm比色杯在分光光度计上以波长625nm处测其吸光度，0.5个麦氏单位的比浊管吸光度在0.08～0.1之间为合格。 4.2.2.2.3 （1）使用前，将比浊管摇匀，目测其外观浊度应均匀一致。若有大颗粒出现，此标准管应更换。每月需更换比浊管或复验比浊管的浊度。 （2）无菌操作将待用的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。 （3）以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水（NaCl），直到浓度与所要求的麦氏 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/ZN-06-2009 培养基性能测试指南 版本 / 修改次：1/0 第 2 页 共 4 页 比浊管的浓度相同（找张白纸，打上平行直线，然后观察比较两管的浊度）。 4.2.2.3生长率测试用工作菌株 目标菌的定量、半定量和生长率试验常用每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。 4.2.2.4选择性测试用工作菌株 培养基选择性试验是将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种到平板或试管上。 4.2.2.5培养条件 按相关标准或要求规定的条件对接种后的培养基进行培养。 4.3固体培养基测试方法 4.3.1定量测试方法（Miles-Misra法） 4.3.1.1按4.2.2 的方法制备工作菌株菌液。 4.3.1.2测试平板和参照平板划分为4个区域并标记（也可不划分四个区域）。 4.3.1.3从最高稀释度开始 ，分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域 4.3.1.4将稀释液用L-玻璃棒涂满整个1/4区域，按标准规定的培养条件培养平板。 4.3.1.5对易计数的区域计数，按公式计算结果PR和SF 生长率PR的计算： PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。 N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）。 选择因子SF的计算： SF = DO - DS DO：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度。 DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度。 非选择性培养培养基上目标菌的生长率最低应为0.7; 选择性培养培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；非目标菌在选择性培养培养基上的SF 至少为2。 4.3.2 该方法适用于固体和液体培养基的性能测试，但仅能作为固体培养基的补充测试。 4.3.2.1按4.2.2 的方法制备工作菌株菌液 4.3.2.2用