液相色谱仪实用技术.pptVIP

第六章液相色谱仪实用技术--分析常见问题--仪器日常维护--仪器常见 故障--色谱柱的使用与保养 分析常见问题 基线噪音 基线漂移 可能的原因： ﹠梯度洗脱 ﹠温度不稳定 (示差检测器） ﹠ 流动相中有污染物 ﹠柱中的流动相没有平衡 ﹠体系中有污染物流出 鬼 峰 峰 型 可能原因： ﹠柱中有死体积 ﹠过滤片部分堵塞 ﹠只有一个双峰——组分的共洗脱 ﹠样品与溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配 峰 型 可能的原因： 部分峰拖尾 ﹠二次保留效应——残留硅醇基的反应 ﹠小峰紧跟在大峰的后面流出 所有峰拖尾 ﹠额外的柱效应 ﹠柱坏/不适当的溶剂 ﹠柱头有污染 ﹠金属 ﹠不适当的样品量 峰 型 可能的原因 ﹠在大峰前，有小峰流出 ﹠柱死体积 ﹠样品溶剂不适当 ﹠过滤片部分堵塞 ﹠柱过载 峰 型 峰宽 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量或降低样品浓度 柱外体积效应的影响 压力 I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 样品在流动相中不溶 进样阀堵塞 - 样品组分与固定相不兼容 保留值漂移 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II.所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III.离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) 保留值漂移 I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 液相色谱仪的日常维护 储液罐 ? 使用HPLC试剂/溶剂 ? 含缓冲盐的流动相过0.25μm膜除去微粒物质 ? 更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染。 ? 定期清洁储液器及附件，防止长微生物 输液泵 ? 流动相要过滤、脱气 ? 密封垫易损坏引起故障 输液泵 ?每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞 ﹠ 使用缓冲盐流动相时,更要小心。 ?注意泵压力不要太高 ﹠要适当调整压力,一般压力上限在10-20MPa，下限为0.5MPa， ﹠防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机 检测器（流动池） ? 保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗 ? 不定期用强溶剂反向冲洗检测器 ? 使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内 ? 检测器灯有一定寿命，平衡和清洗色谱柱时不要开灯。 流动池的清洗方法（尽量少用） ?断开所有的管路，把针泵接到流动池的出口 ?用10--20ml纯水冲洗流动池（要确认所用溶剂已洗干净） ?用10--20ml的20%硝酸冲洗流动池（可以适当停留30min左右） ?用30—40ml左右纯水冲洗 ?用10—20ml左右甲醇冲洗 ?用干净的气体吹干 进样阀 ?清洗 停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成进样阀转子面磨损或堵塞 ?注射器必须使用仪器专用进样器—平头注射器 色谱柱—防止柱性能下降 1、溶剂的化学腐蚀性不能太强； 2、避免颗粒物在柱头沉降； 3、柱压不能太高，防止冲击太大；固定相流失 4、尽可能使用预柱 5、色谱柱应在规定的pH范围内使用 6、每天实验后清洗色谱柱柱； 7、定期再生色谱柱 8、长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐, 保存在甲醇或乙腈，将柱两端拧紧,保持 柱填料湿润。 记录器数据处理系统 ?色谱工作站: 防止网上病毒损坏软件 ?记录仪: 热敏式打印头要注意记录纸的质量,开机前注意检查走纸部件,不要卡纸. 常见故障及解决方法 储液器 ?脱气不充分(噪声大，出毛刺) 用He脱气, 真空脱气, 超声脱气, 加热回馏脱气,(混合流动相不宜) ?流动相供给不畅，泵压力不稳 流动相接近用完 过滤器堵塞（有颗粒，长霉） 流速过高,阻力大,造成空化现象. 解决的办法是:降低流速;换大孔过滤器加大管路内径;抬高储液器. 储液器 ?储液器或流动相被污染 产生有规则的噪声； 基线上升，梯度洗脱出鬼峰； ?原因: ?溶剂质量差（含杂质多）； ?配流动相的