分子生物学新技术及其应用.ppt

Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * miRNA基因克隆的基本步骤 （四）克隆及测序鉴定 含3‘与5’端接头的小分子RNA，经RT-PCR扩增后连接至合适的载体，转化克隆，最后用相关方法鉴定阳性克隆。 （五）PAGE/Northern blotting验证 PAGE/Northern blotting方法是确认microRNA 最有效 和常用的方法。 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * PAGE/Northern blotting （一）基本原理：PAGE/Northern blotting与常规核酸杂交技术原理相同，都是根据碱基互补配对原理，设计特异探针，与膜杂交，经放射自显影后分析杂交信号。唯一的差别在于选择对小分子RNA分离效率更高的PAGE代替琼脂糖作为分离胶。 （二）应用：PAGE/Northern blotting方法能提供准确的杂交信息以及有效检测低丰度的RNA分子，在验证micorRNA基因芯片结果及降低假阳性方面具有重要作用，是目前研究microRNA的重要技术。 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * PAGE/Northern blotting基本操作步