发酵工程 第8章 发酵过程控制.ppt

高密度发酵及过程控制 1. 高密度发酵 2.高密度发酵策略 3.高密度发酵技术 4.高密度发酵存在的问题 1. 高密度发酵 代谢产物的合成是靠菌体作为生产者来完成的。 高细胞密度发酵就是为了适应这一要求而得到广泛的重视。 高密度发酵：在发酵过程中保持较高的细胞密度，同时细胞或菌体的生产能力保持在较佳的状态。 2.高密度发酵策略 使用最低合成培养基以便进行准确的培养基设计和计算生长得率。 优化细胞生长速率，使得碳源能被充分利用和获得较高的产率，用养分流加来限制菌的生长速率还能控制培养物对氧的需求和产热速率。 可用碳源作为限制性养分，且采用补料分批发酵来实现高密度发酵。 3.高密度发酵技术 用于高密度发酵的生物反应器类型： 搅拌罐，透析膜反应器， 气升式反应器，气旋式反应器 在工业化生产中，通常采用的是搅拌罐与补料工艺来进行高细胞密度发酵。 重组大肠杆菌高密度发酵成功的关键技术是补料策略，限制性基质（葡萄糖）的流加模式有3种：恒速流加补料、变速流加补料和指数流加补料。 4. 高密度发酵存在的问题 水溶液中的固体与气体物质的溶解度，基质对生长的限制或抑制作用，基质与产物的不稳定性和挥发性，产物或副产物的积累达到抑制生长的水平，高浓度的CO2与热的释放速率，高的氧需求以及培养基的粘度不断增加等 。 化学消沫剂是表面活性剂。 一般好的消沫剂应同时具备降低液膜的机械强度和表面粘度这两种性能。 1. 高密度发酵 2.高密度发酵策略 3.高密度发酵技术 4.高密度发酵存在的问题 代谢产物的合成是靠菌体作为生产者来完成的。 使用最低合成培养基以便进行准确的培养基设计和计算生长得率。 用于高密度发酵的生物反应器类型： 搅拌罐，透析膜反应器， 气升式反应器 在工业化生产中，通常采用的是搅拌罐与补料工艺来进行高细胞密度发酵。 重组大肠杆菌高密度发酵成功的关键技术是补料策略。 水溶液中的固体与气体物质的溶解度，基质对生长的限制或抑制作用，基质与产物的不稳定性和挥发性，产物或副产物的积累达到抑制生长的水平，高浓度的CO2与热的释放速率，高的氧需求以及培养基的粘度不断增加等 。 常用消泡剂的种类 （1）天然油脂 最早使用，来源容易，价格低，使用简单，一般来说没有明显副作用。 豆油、菜油、鱼油等 但油脂如保藏不好，易变质，使酸值增高，对发酵有毒性。 此外，有些油是发酵产物的前体，如豆油是红霉素的前体，鱼油是螺旋霉素的前体。 （2）聚醚类消泡剂 聚醚类消泡剂种类很多。 我国常用的主要是甘油三羟基聚醚。 六十年代发明此类消泡剂，美国道康宁化学公司首先投产。 它是以甘油为起始剂，由环氧丙烷，或环氧乙烷与环氧丙烷的混合物进行加成聚合而制成的。 只在甘油分子上加成聚合环氧丙烷的产物叫聚氧丙烯甘油定名为GP型消泡剂； 用于链霉素发酵，代替天然油，加入基础料，效果很好。 在GP型消泡剂的聚丙二醇链节末端再加成环氧乙烷，成为链端是亲水基的聚氧乙烯氧丙烯甘油，也叫GPE型消泡剂（泡敌）。 GP型的消泡剂亲水性差，在发泡介质中的溶解度小，所以宜使用在稀薄的发酵液中。 GPE型消泡剂亲水性较好，在发泡介质中易铺展，消泡能力强，但溶解度也较大，消泡活性维持时间短，因此用在粘稠发酵液中效果较好。 （3）高碳醇 C7~C9的醇是最有效的消泡剂。 C12~C22的高碳醇借助适当的乳化剂配制成粒度为4~9μm，含量为20~50%的水乳液，即是水体系的消泡剂。 还有些成酯，如苯乙醇油酸酯、苯乙酸月桂醇酯等在青霉素发酵中具有消泡作用，后者还可作为前体。 （4）硅酮类 最常用的是聚二甲基硅氧烷，也称二甲基硅油。 它挥发性低并具有化学惰性，比较稳定且毒性小。 纯粹的聚二甲基硅氧烷，不经分散或乳化处理难以作为消泡剂。 乳化剂有甘油单硬脂酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇单硬脂酸酯（Tween60）、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯（Tween80）、山梨糖醇单硬脂酸酯（Span60）、山梨糖醇三硬脂酸酯（Span65）。 消沫剂的使用方法： a) 机械分散、或借助分散剂 b) 与载体一起使用 c) 多种消沫剂并用 d) 利用乳化剂增强消沫剂的消沫作用 值得注意的是：消泡剂有选择性。消泡剂用多了有毒性，而且还影响通气和气体分散，因此要少量地加。 泡沫形成原因 气液接触 气体从外部进入 气体从内部产生 含助泡剂 起泡速度高于破泡速度 小结 发酵过程泡沫产生的原因 机械搅拌带入气体 呼吸产生气体 培养基中含有助泡剂 发酵过程泡沫产生的原因 通气搅拌 培养基配比与原料组成 菌种、种子质量和接种量 灭菌质量 发酵过程起泡的利弊 有利之处：气体分散、增加气液接触面